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malstose

金虫 (正式写手)


[交流] 请教:如何获得未知病毒的基因组?

先请教下各位虫友,如何获得未知病毒的基因组呢?比如肯定在一个样品里面存在一种病毒,用何种方法获得其全基因组呢?
测序的话,应该拿什么去测序?
先谢谢啦!
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niil

金虫 (正式写手)


★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励应助交流! 2013-03-26 04:24:44
引用回帖:
14楼: Originally posted by malstose at 2013-03-25 18:44:19
谢谢!但DNA序列不清楚,如何构建组文库?...

这个需要做些预实验看看。
首先确定这是DNA病毒。
然后富集病毒得到足量的DNA。
使用多种限制性内切酶酶切,让后电泳看看。优选酶切图谱条带丰富的。
然后可以进行文库构建。
选择2-3种限制性内切酶分别酶切足量的病毒DNA。
利用每种限制性内切酶的酶切产物分别构建DNA文库。(如果感觉DNA量不多,那最好加接头,然后PCR扩增之后再建库)
每个文库筛鉴定出合适的克隆进行测序。
最后将得到的测序结果根据片段重叠区进行组装,得到完整的病毒DNA序列。
17楼2013-03-25 20:52:30
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)


★ ★
malstose(金币+1): 谢谢参与
malstose(gyesang代发): 金币+1, 鼓励发贴交流,为楼主问题解决提供可能的线索! 2013-04-27 14:54:58
全基因组测序,这是最好的方法!基因组小,应该花不需要太多钱!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2013-03-23 20:41:07
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zxd95

至尊木虫 (著名写手)


全基因组测序,这是最好的方法!基因组小,应该花不需要太多钱!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2013-03-23 20:41:24
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zhibao214

金虫 (小有名气)



malstose(金币+1): 谢谢参与
用小RNA测序也可以啊
5楼2013-03-24 09:08:51
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Afunti

木虫 (正式写手)



malstose(金币+1): 谢谢参与
看楼主的专业是植物病理学,是不是个植物病毒?
7楼2013-03-24 10:04:24
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浏阳河畔

铁虫 (小有名气)



malstose(金币+1): 谢谢参与
加接头
8楼2013-03-24 11:28:21
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niil

金虫 (正式写手)



malstose(金币+1): 谢谢参与
病毒的核酸分子很小,可以考虑自己构建基因组文库然后测序。
10楼2013-03-25 15:31:17
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
7楼: Originally posted by Afunti at 2013-03-24 10:04:24
看楼主的专业是植物病理学,是不是个植物病毒?

嗯,我是做植物病毒方面的,呵呵~
11楼2013-03-25 18:42:03
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
5楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-24 09:08:51
用小RNA测序也可以啊

谢谢~呵呵
12楼2013-03-25 18:42:12
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
8楼: Originally posted by 浏阳河畔 at 2013-03-24 11:28:21
加接头

哦,然后呢?
13楼2013-03-25 18:42:50
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by niil at 2013-03-25 15:31:17
病毒的核酸分子很小,可以考虑自己构建基因组文库然后测序。

谢谢!但DNA序列不清楚,如何构建组文库?
14楼2013-03-25 18:44:19
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浏阳河畔

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
13楼: Originally posted by malstose at 2013-03-25 18:42:50
哦,然后呢?

因为接头的序列是已知的啊,然后你就懂的

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

15楼2013-03-25 18:47:34
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malstose

金虫 (正式写手)


送鲜花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 浏阳河畔 at 2013-03-25 18:47:34
因为接头的序列是已知的啊,然后你就懂的...

一般用什么方法加结头呢,如果是环形的DNA分子呢?
16楼2013-03-25 18:50:50
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zhibao214

金虫 (小有名气)


引用回帖:
3楼: Originally posted by zxd95 at 2013-03-23 20:41:07
全基因组测序,这是最好的方法!基因组小,应该花不需要太多钱!

谢谢,我已经拿到序列了,就是不知道后面怎么分析,也不能做进化树,也不能分析重组,就是想了解还能通过这些变异位点深入的分析点什么,发个好文章,哈哈
18楼2013-03-26 21:14:55
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zhibao214

金虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-24 09:08:51
用小RNA测序也可以啊

谢谢,已经测过了,就是不知道还能深入分析什么,看看通过变异位点的知识分析一下能发什么文章
19楼2013-03-26 21:17:09
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zhibao214

金虫 (小有名气)


引用回帖:
18楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-26 21:14:55
谢谢,我已经拿到序列了,就是不知道后面怎么分析,也不能做进化树,也不能分析重组,就是想了解还能通过这些变异位点深入的分析点什么,发个好文章,哈哈...

刚才没看清标题,我的情况是病毒的基因组我已经拿到了,变异位点也找到了
20楼2013-03-26 21:19:20
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zhibao214

金虫 (小有名气)


引用回帖:
19楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-26 21:17:09
谢谢,已经测过了,就是不知道还能深入分析什么,看看通过变异位点的知识分析一下能发什么文章...

我的问题是自己已经用小RNA测序过了,病毒基因组的变异位点也拿到了,就是不知道再分析什么了
21楼2013-03-26 21:20:23
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
19楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-26 21:17:09
谢谢,已经测过了,就是不知道还能深入分析什么,看看通过变异位点的知识分析一下能发什么文章...

额,你好,这貌似是你自己的回复吧?
22楼2013-03-27 12:36:03
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malstose

金虫 (正式写手)


引用回帖:
18楼: Originally posted by zhibao214 at 2013-03-26 21:14:55
谢谢,我已经拿到序列了,就是不知道后面怎么分析,也不能做进化树,也不能分析重组,就是想了解还能通过这些变异位点深入的分析点什么,发个好文章,哈哈...

拿到序列后可以分析ORFs的情况,或者二级结构、编码蛋白等分析的,可以向Genbank提交序列啊。
23楼2013-03-27 12:37:01
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简单回复
2013-03-23 17:02   回复  
malstose(金币+1): 谢谢参与
2013-03-24 09:53   回复  
malstose(金币+1): 谢谢参与
haixiawu9楼
2013-03-25 15:00   回复  
malstose(金币+1): 谢谢参与
fd_lxhua24楼
2013-03-28 20:43   回复  
malstose(金币+1): 谢谢参与
引用回帖:
8楼: Originally posted by 浏阳河畔 at 2013-03-24 11:28:21 加接头

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