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新手请教一下,换了个基因就不表达是什么原因
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zzhjiangnan
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新手请教一下,换了个基因就不表达是什么原因
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我的质粒上卡纳霉素基因表达量很高,但是我保留其他组件(ATG之前的序列),在同一质粒上只把卡那霉素基因换成另一种蛋白基因,就不表达了,这个从理论上应该怎么讲?求各位大神帮忙指点分析一下。
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1楼
2014-10-29 22:44:33
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zzhjiangnan
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Originally posted by
sun_in_night
at 2014-10-29 23:40:36
信息好少。。。你怎么替换的kan基因?如果是酶切,确定酶切位点不会切断其他的质粒序列?如果你替换了kan,你怎么筛选的你的质粒,还有第二个抗性基因吗?
楼主最好把质粒的图放上来,这样才便于大家帮你分析
不好意思我说的太理论了,我是把质粒kan基因前的1000bp片段克隆出来,连到这个质粒的我的目的基因前面(1000bp和我的目的基因之间有6bp的酶切位点),但是目的基因就不表达。
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2014-10-31 13:23:50
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2014-10-31 13:35:38
信息好少。。。你怎么替换的kan基因?如果是酶切,确定酶切位点不会切断其他的质粒序列?如果你替换了kan,你怎么筛选的你的质粒,还有第二个抗性基因吗?
楼主最好把质粒的图放上来,这样才便于大家帮你分析
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2楼
2014-10-29 23:40:36
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蛋白表达是个较为复杂的问题
同源 异源?
宿主选择?
稀有密码子?
诱导条件优化等等。。。。。。
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未完成
3楼
2014-10-31 11:27:00
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3楼
:
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灰血动物
at 2014-10-31 11:27:00
蛋白表达是个较为复杂的问题
同源 异源?
宿主选择?
稀有密码子?
诱导条件优化等等。。。。。。
在谷氨酸棒杆菌里用一种质粒,它的kan抗性蛋白表达量很高,我把质粒kan基因前的1000bp片段克隆出来,连到这个质粒的我的目的基因前面(1000bp和我的目的基因之间有6bp的酶切位点),但是目的基因就不表达。是密码子的问题吗?
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5楼
2014-10-31 13:26:18
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