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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] 大肠杆菌BL21(DE3)转化,平板上长满了密密麻麻很小的转化子 已有2人参与

最近做转化,不管是电转化,还是Cacl2转化,复苏后的菌液取100uL涂板,最后板子上密密麻麻长满了很小的菌落,根本就没办法挑取单菌落,平板上均加了抗生素,50ug/mL和100ug/mL都试过,转化子仍然很多,这是什么原因呢?
     麻烦遇到到同种问题的亲给点意见?
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能原因两个:抗生素失效,重新配过;感受态细胞污染,重新划线纯化。
2楼2015-04-10 09:41:28
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同意楼上,抗生素失效和感受态菌株污染的可能性很大。
3楼2015-04-10 09:54:07
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
3楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2015-04-10 09:54:07
同意楼上,抗生素失效和感受态菌株污染的可能性很大。

哦,感受态细胞时从三个月前划线的平板上挑取的单菌落。考虑到这个原因,重新活化中,,,,
喜欢生物,所以想好好研究下去!
4楼2015-04-10 14:49:21
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2015-04-10 09:41:28
可能原因两个:抗生素失效,重新配过;感受态细胞污染,重新划线纯化。

恩,谢谢,纯化中,,,希望一切顺利。抗生素应该正常,因为分别在液体LB中加抗生素和不加抗生素挑取单菌落培养,同样的时间,能看到生物量明显有区别
喜欢生物,所以想好好研究下去!
5楼2015-04-10 14:50:34
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