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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » pcp20转化bl21 de3 怎么这么难
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)

[求助] pcp20转化bl21 de3 怎么这么难 已有4人参与

由red系统对bl21 de3 基因组上的基因进行敲除，遇到非常头疼的问题，一开始是pkd46 死活转不进去，用了好多办法，最后终于转进去了并得到了重组子，接下来想把inframe去掉，pcp20又死活转不进去，快崩溃了，，，bl21 de3这么难操作吗？之前同样方法对mg1655基因敲除很快就敲掉了。
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1楼 2014-09-07 19:51:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

song淡定

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主你的pkd46是用什么方法转进去的？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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5楼2014-09-16 21:58:42
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by bolysu at 2014-09-18 13:40:22
是啊，我也很想知道你是怎么转进去的啊？我也是一直转不进去，放弃了的...

pcp20最终转进去了，用SOB培养基做的感受态，全部涂板（双抗的）只长了五个克隆，所以你不妨试试SOB培养基做感受态试试
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8楼2014-09-22 18:36:02
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普通回帖

小小cool

金虫 (正式写手)
电转么

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-07 20:06:09
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-09-07 20:06:09
电转么

电转化转都试过了 就是转不进去
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3楼2014-09-08 18:33:55
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joyceashlay

新虫 (小有名气)
别着急，我也是敲不掉。。
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4楼2014-09-15 18:29:44
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bolysu

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
6楼2014-09-18 13:40:22
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Earl_zw

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by song淡定 at 2014-09-16 21:58:42
楼主你的pkd46是用什么方法转进去的？

电转的  也是转了好多次才转进去的
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7楼2014-09-22 12:55:21
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小小cool

金虫 (正式写手)
你好，可以交换点pcp20载体吗？我们的pcp20只有amp抗性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-09-22 21:24:09
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视界悲scut

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

转质粒的话，不需要电转的啊，做化转感受态就好了。小量制备化转感受态有takara的试剂盒，很方便，也不贵
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10楼2014-10-04 11:14:22
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