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renfan1990

新虫 (初入文坛)

[交流] 跑pcr总是跑不出来 求大神指教啊 已有3人参与

前面123孔是用同一对引物，其中1是空白，目的片段为2.8k；456也是用同一对引物，4为空白,目的片段为4.6k；789也是用同一对引物，7为对照，目的片段为5k；maker为2000plus。maker之后的前两个孔是用与123一样的引物跑的，目的片段2.8k左右，只是酶用的是  tsingke  I-5™  2X High-Fidelity Master Mix 扩增的 。后面两个孔不用管，只需要前面几个。求大神指导，怎么办，引物已经换了好几对了 ，就是扩不出来。谢谢！

跑pcr总是跑不出来 求大神指教啊
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1楼 2015-04-02 15:58:33
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
★
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你能确定你的引物是正确的？
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2楼2015-04-02 18:41:54
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 22:50:22
最好确认一下模板浓度和质量，不行就用巢式，你不是已经有好多引物了吗，再不行换酶。
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3楼2015-04-03 08:15:18
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-03 22:50:38
那条亮带不是你的目的片段吗？引物换几对了还是这样的话，就别换了，巢式也不是很好做的，5kb左右的片段对于一般的酶可能难以扩增了，也没必要使用LA Taq 酶，一般的热启动聚合酶就行
注意选酶吧，可以参考http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-04-03 09:51:42
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