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renfan1990

新虫 (初入文坛)

[交流] 跑pcr总是跑不出来 求大神指教啊 已有3人参与

前面123孔是用同一对引物,其中1是空白,目的片段为2.8k;456也是用同一对引物,4为空白,目的片段为4.6k;789也是用同一对引物,7为对照,目的片段为5k;maker为2000plus。maker之后的前两个孔是用与123一样的引物跑的,目的片段2.8k左右,只是酶用的是  tsingke  I-5™  2X High-Fidelity Master Mix 扩增的 。后面两个孔不用管,只需要前面几个。求大神指导,怎么办,引物已经换了好几对了 ,就是扩不出来。谢谢!

跑pcr总是跑不出来 求大神指教啊
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-03 22:50:38
那条亮带不是你的目的片段吗?引物换几对了还是这样的话,就别换了,巢式也不是很好做的,5kb左右的片段对于一般的酶可能难以扩增了,也没必要使用LA Taq 酶,一般的热启动聚合酶就行
注意选酶吧,可以参考http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
4楼2015-04-03 09:51:42
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你能确定你的引物是正确的?
2楼2015-04-02 18:41:54
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hanxiaominhu

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 22:50:22
最好确认一下模板浓度和质量,不行就用巢式,你不是已经有好多引物了吗,再不行换酶。
3楼2015-04-03 08:15:18
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