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跑pcr总是跑不出来 求大神指教啊已有3人参与
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前面123孔是用同一对引物，其中1是空白，目的片段为2.8k；456也是用同一对引物，4为空白,目的片段为4.6k；789也是用同一对引物，7为对照，目的片段为5k；maker为2000plus。maker之后的前两个孔是用与123一样的引物跑的，目的片段2.8k左右，只是酶用的是 tsingke I-5™ 2X High-Fidelity Master Mix 扩增的 。后面两个孔不用管，只需要前面几个。求大神指导，怎么办，引物已经换了好几对了 ，就是扩不出来。谢谢！ 7B52A3783CC65D956C6D47A05EA833DE.jpg |
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yangyang1991
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2楼2015-04-02 18:41:54
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那条亮带不是你的目的片段吗？引物换几对了还是这样的话，就别换了，巢式也不是很好做的，5kb左右的片段对于一般的酶可能难以扩增了，也没必要使用LA Taq 酶，一般的热启动聚合酶就行 注意选酶吧，可以参考http://www.detaibio.com/dna-taq-polymerase.html |
4楼2015-04-03 09:51:42