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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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Ceci818

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物与PMD18-T连接不上 已有7人参与

易错PCR产物回收后与pMD18-T连接,几乎都长蓝斑,长出两种蓝斑,一种是中间蓝色,边缘近白色,一种是全部都是蓝色的。连接时间是过夜连接,12-16h。有一次连接后长出蓝白斑,但是挑出的白斑做PCR验证之后都是假阳性。求各位大神相助。问题出现在哪里?求帮助!
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墨尔本机器

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Ceci818(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-03-30 20:54:10
Ceci818: 金币+7, ★★★很有帮助 2015-04-02 20:37:43
应该是你的回收的目的基因浓度过低,建议你进行二次PCR之后回收产物,或者多管回收产物浓缩一下。低浓度产物连接效率很低,延长连接时间也没用,其实对18t来讲,1000bp的片段16度连接2h已经100%保险了,问题就是你的产物不好
6楼2015-03-30 20:48:54
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
18 t可以amp抗生素筛选呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
2楼2015-03-30 18:00:25
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Ceci818

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 18:00:25
18 t可以amp抗生素筛选呀。

意思是说我不用蓝白斑筛选。直接加抗性,然后挑阳性是么?
3楼2015-03-30 18:35:00
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781055707

木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Ceci818 at 2015-03-30 18:35:00
意思是说我不用蓝白斑筛选。直接加抗性,然后挑阳性是么?...

恩,我一直是这么好的,六个里面有三个是阳性。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
采菊东篱下,悠然见南山。
4楼2015-03-30 18:38:03
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