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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物与PMD18-T连接不上
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Ceci818

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物与PMD18-T连接不上 已有7人参与

易错PCR产物回收后与pMD18-T连接，几乎都长蓝斑，长出两种蓝斑，一种是中间蓝色，边缘近白色，一种是全部都是蓝色的。连接时间是过夜连接，12-16h。有一次连接后长出蓝白斑，但是挑出的白斑做PCR验证之后都是假阳性。求各位大神相助。问题出现在哪里？求帮助！
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1楼 2015-03-30 16:15:33
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shenma521

铁虫 (小有名气)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-04-01 22:46:15
引用回帖:
9楼: Originally posted by shenma521 at 2015-03-31 14:59:10
换个载体连接一下，用blunt载体连接你的片段，blunt载体商业化的也别好用。

283.4μg/ml的片段 你需要电泳检测一下质量
直接取三微升的片段 加入 一微升的blunt 混匀放pcr仪内25度连接15分钟后直接连接转化 涂AMP平板 M13F+R挑克隆鉴定。
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10楼2015-03-31 15:04:59
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
18 t可以amp抗生素筛选呀。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-03-30 18:00:25
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Ceci818

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-03-30 18:00:25
18 t可以amp抗生素筛选呀。

意思是说我不用蓝白斑筛选。直接加抗性，然后挑阳性是么？
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3楼2015-03-30 18:35:00
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781055707

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Ceci818 at 2015-03-30 18:35:00
意思是说我不用蓝白斑筛选。直接加抗性，然后挑阳性是么？...

恩，我一直是这么好的，六个里面有三个是阳性。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2015-03-30 18:38:03
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