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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 请问DNA提取的结果这样的原因
汕头大学海洋科学接受调剂
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心悦有天

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请问DNA提取的结果这样的原因 已有1人参与

求助各位，我使用16s rDNA鉴定一株细菌，现在刚进行了第一步，按照某试剂盒说明提取基因组DNA，紫外测得提取的DNA样品，A260/A280为2.22，A260为1.946，核酸浓度为97.3 ng/μL。有几个问题：
（1）不是一般A260/A280在1.7-1.9之间是DNA纯度比较高，请问我这个为什么还大于2？是RNA污染吗？
（2）这个结果可以直接用于接下来的PCR吗？
（3）下面照片是样品的峰形图，为什么不是呈现最高峰的那种？
另（4）接下来PCR的引物是通用引物27F和1492R，但看一些文献里这两个引物还有所差异？
没接触过分子生物学，希望做过的筒子多度指导，谢了~~

请问DNA提取的结果这样的原因
DNA提取结果.jpg
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1楼 2015-03-24 17:21:43
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打败番茄炒蛋

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
心悦有天: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-05-07 16:39:13
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-05-07 22:08:07
A260/A280和A260/A230是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。
A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。A280是蛋白质的吸光度。

你的A260/A230 是0.29? 这样的话不建议你PCR
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天生自弃难丽质
2楼2015-05-07 08:43:18
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心悦有天

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 打败番茄炒蛋 at 2015-05-07 08:43:18
A260/A280和A260/A230是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。 ...

还是谢谢你，我的帖子过去这么久了，实验也都完成了，最后我的A260/A280为2.22，PCR做了结果还可以
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3楼2015-05-07 16:34:33
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红红三缺一

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 心悦有天 at 2015-05-07 16:34:33
还是谢谢你，我的帖子过去这么久了，实验也都完成了，最后我的A260/A280为2.22，PCR做了结果还可以...

你好，我也想用通用引物27F和1492R扩增菌DNA，请问您方便把序列发给我一下么？非常感谢q 862237138
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4楼2015-05-07 20:44:57
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baichi121234

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
5楼2015-05-07 22:12:33
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心悦有天

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 红红三缺一 at 2015-05-07 20:44:57
你好，我也想用通用引物27F和1492R扩增菌DNA，请问您方便把序列发给我一下么？非常感谢q 862237138...

很久没上小木虫了，不知你是否还需要，这是我用的引物序列
27F：5'-AGAGT  TTGAT  CCTGG  CTCAG-3'
1492R： 5'-GGTTA  CCTTG  TTACG  ACTT-3'
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6楼2015-06-09 16:13:42
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