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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 16SrDNA鉴定需不需要PCR纯化
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原孟子

金虫 (小有名气)

[求助] 16SrDNA鉴定需不需要PCR纯化 已有2人参与

如题所示，想知道操作过程中到底需不需要做PCR纯化这一步，我看小虫子们有的直接PCR扩增然后直接去测序的，也有扩增纯化再测序的，我做的主要是从溢油海岸带中分离纯化鉴定纯菌。。。所以不知道是不是需要做纯化这一步，纠结ing，请如实告诉我，谢谢啦
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
1楼 2015-03-23 20:31:08
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clark2010

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2015-03-24 09:18:56
是什么菌无所谓。我从来都是纯化之后送公司的。即使你不纯化，去了公司，也会先给你纯化一下才上机测序的。
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2楼2015-03-24 00:07:32
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Little栋栋

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-03-24 09:19:03
原孟子: 金币+20, ★★★很有帮助 2015-03-24 18:56:14
朋友你好，我是做乳杆菌的，16srDNA序列分析 要先提取DNA然后PCR,扩增后纯化一下 送去测序
严格来讲还是应该克隆后再测序，选用克隆载体上的引物可以完整准确的测出16SR序列
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3楼2015-03-24 00:24:10
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Little栋栋 at 2015-03-24 00:24:10
朋友你好，我是做乳杆菌的，16srDNA序列分析 要先提取DNA然后PCR,扩增后纯化一下 送去测序
严格来讲还是应该克隆后再测序，选用克隆载体上的引物可以完整准确的测出16SR序列

好的，谢谢啦
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
4楼2015-03-24 18:55:51
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原孟子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by clark2010 at 2015-03-24 00:07:32
是什么菌无所谓。我从来都是纯化之后送公司的。即使你不纯化，去了公司，也会先给你纯化一下才上机测序的。

好的，谢啦
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认真吃饭，认真睡觉，认真生活。
5楼2015-03-24 18:56:04
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Longnil

新虫 (小有名气)
是不需要纯化的，我们的扩出16s后直接送到公司测序的
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lifeisbeautiful
6楼2015-03-28 08:58:34
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zergbloody

铁虫 (正式写手)
需要纯化的 不过公司会代做

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2015-03-28 10:08:27
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xunuo_98
8楼2015-03-29 10:06:39
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冰尘子

铁虫 (初入文坛)
一般公司会做一次纯化，这要看你的样品如何，我们一般送公司前要检测自己样品纯度（260/280)和浓度(公司测序有要求)是否达标。环境样品含有杂质（腐殖酸）较多。
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走好人生路
9楼2015-04-08 13:49:43
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