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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 提不出质粒，急求！！！
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提不出质粒，急求！！！ 已有3人参与

我一直用的自己配的碱裂解液1,2,3提质粒，之前一直没出过问题，自从将PBI121与片段重组后提质粒就提不出来，加碱裂解液3后现象就不对劲，之前是那种粘成一团的东西，现在就只是浑浊，离心后也是下面沉淀，溶液浑浑的，加氯仿后特别干净！东西后来都新配了，到底怎么回事啊？？？
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食品研究生，何去何从
1楼 2015-03-12 15:46:24
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-12 16:10:17
PBI121载体是个表达载体还是克隆载体？？如果是表达载体，那么提不出来，或者很少。如果是克隆载体，就有问题了。
PBI121与片段重组后的质粒你验证是对的了以后提的还是提质粒要验证的？？
如果是验证是对的了以后 ...

我是准备提完质粒后验证的，我不太清楚表达载体和克隆载体的概念，我是把PBI121载体与片段基因连接转入大肠杆菌，然后再提质粒验证的，那大肠杆菌应该是作为克隆载体，PBI121 是表达载体吧，我现在准备直接提PBI121质粒看看是不是试剂的问题 ，
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食品研究生，何去何从
3楼2015-03-13 09:15:51
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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sansejin20: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-13 09:16:24
PBI121载体是个表达载体还是克隆载体？？如果是表达载体，那么提不出来，或者很少。如果是克隆载体，就有问题了。
PBI121与片段重组后的质粒你验证是对的了以后提的还是提质粒要验证的？？
如果是验证是对的了以后提的，有可能是因为质粒问题，我自己有好几个菌都是这样的，需要划线挑单克隆再提质粒，就多了。
如果是提质粒要验证的，那原因就多了，污染啊，操作啊什么的很多。我以前就加完123后也这样提不出来，又重新连接转化做的。
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2楼2015-03-12 16:10:17
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匿名

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sansejin20: 金币+2, ★有帮助, 好的 谢谢 2015-03-13 13:52:51
本帖仅楼主可见
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4楼2015-03-13 12:32:47
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sansejin20: 金币+3, ★有帮助, 好的 谢谢 2015-03-17 11:20:13
感受态的问题，如果（之前是那种粘成一团的东西，现在就只是浑浊）你的感受态污染了，里面肯定没有质粒，但感受态带了抗性。我在DH5A上就碰到过这种事，楼主换感受态吧。
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采菊东篱下，悠然见南山。
5楼2015-03-13 15:08:54
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