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sansejin20

铜虫 (初入文坛)

[求助] 提不出质粒,急求!!! 已有3人参与

我一直用的自己配的碱裂解液1,2,3提质粒,之前一直没出过问题,自从将PBI121与片段重组后提质粒就提不出来,加碱裂解液3后现象就不对劲,之前是那种粘成一团的东西,现在就只是浑浊,离心后也是下面沉淀,溶液浑浑的,加氯仿后特别干净!东西后来都新配了,到底怎么回事啊???
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食品研究生,何去何从
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sansejin20: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-03-13 09:16:24
PBI121载体是个表达载体还是克隆载体??如果是表达载体,那么提不出来,或者很少。如果是克隆载体,就有问题了。
PBI121与片段重组后的质粒你验证是对的了以后提的还是提质粒要验证的??
如果是验证是对的了以后提的,有可能是因为质粒问题,我自己有好几个菌都是这样的,需要划线挑单克隆再提质粒,就多了。
如果是提质粒要验证的,那原因就多了,污染啊,操作啊什么的很多。我以前就加完123后也这样提不出来,又重新连接转化做的。
2楼2015-03-12 16:10:17
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sansejin20

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-03-12 16:10:17
PBI121载体是个表达载体还是克隆载体??如果是表达载体,那么提不出来,或者很少。如果是克隆载体,就有问题了。
PBI121与片段重组后的质粒你验证是对的了以后提的还是提质粒要验证的??
如果是验证是对的了以后 ...

我是准备提完质粒后验证的,我不太清楚表达载体和克隆载体的概念,我是把PBI121载体与片段基因连接转入大肠杆菌,然后再提质粒验证的,那大肠杆菌应该是作为克隆载体,PBI121 是表达载体吧,我现在准备直接提PBI121质粒看看是不是试剂的问题 ,
食品研究生,何去何从
3楼2015-03-13 09:15:51
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匿名

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sansejin20: 金币+2, 有帮助, 好的 谢谢 2015-03-13 13:52:51
本帖仅楼主可见
4楼2015-03-13 12:32:47
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sansejin20: 金币+3, 有帮助, 好的 谢谢 2015-03-17 11:20:13
感受态的问题,如果(之前是那种粘成一团的东西,现在就只是浑浊)你的感受态污染了,里面肯定没有质粒,但感受态带了抗性。我在DH5A上就碰到过这种事,楼主换感受态吧。
采菊东篱下,悠然见南山。
5楼2015-03-13 15:08:54
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风随心动

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
你好,请问我可以向你求助点PBI121质粒吗?或者交换也可以,谢谢。
偶见繁星梦九天,只愿沧海桑田始如先。
6楼2015-10-20 12:35:53
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