| 查看: 2561 | 回复: 12 | ||
laqiwe铁虫 (正式写手)
|
[求助]
pET原核表达系统的几个疑问 已有3人参与
|
|
|
如图是pET-30a的克隆表达区域 1.原核表达都必需RBS序列，那么RBS序列前的XbaI这个酶切位点有什么用？ 2.假设用EcoRI和BamHI两个酶切位点插入，那么NdeI后的His-Tag和S-Tag被表达后如何除去？ 3.假设还是用EcoRI和BamHI两个酶切位点插入目的基因，如果目的基因两端的酶切位点顺序与载体的相反怎么办？  图像 1.png |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有100人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于目的基因导入pet-28a中是否会发生移码问题!
已经有10人回复
- pet28和pet21表达的蛋白对于蛋白结晶的区别
已经有8人回复
- 原核表达蛋白量很低
已经有13人回复
- 做了原核表达，表达量很低，求助~~
已经有16人回复
- 原核表达蛋白时标签无论在N端还是C端蛋白折叠时都被折进去了，怎么办
已经有18人回复
- 原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
已经有12人回复
- 原核表达做不出来了！
已经有15人回复
- 原核表达重组表达载体的连问题
已经有14人回复
- pET-30a(+)不表达
已经有16人回复
- 原核表达和SDS-PAGE
已经有9人回复
- 做原核表达引物设计的有关问题
已经有14人回复
- PET系统原核表达手册
已经有11人回复
- 求原核表达诱导表达具体操作？？？
已经有14人回复
- 真核表达载体 原核 区别与扩增
已经有8人回复
- 原核表达 pET32a和pET30a Western blot问题
已经有9人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 含信号肽的序列能否在原核表达系统PET-32a中表达
已经有7人回复
- 【求助/交流】原核表达，预测的信号肽序列是否包括
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于原核表达中稀有密码子的问题
已经有8人回复
- [求助]原核表达如何减少包涵体
已经有23人回复
wangyue115
木虫 (正式写手)
冰山火种
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 10481.7
- 帖子: 696
- 在线: 40小时
- 虫号: 292196
- 注册: 2006-11-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laqiwe(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-08 19:41:57
laqiwe: 金币+45, ★★★很有帮助 2015-03-09 08:39:36
感谢参与，应助指数 +1
laqiwe(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-08 19:41:57
laqiwe: 金币+45, ★★★很有帮助 2015-03-09 08:39:36
|
1,告诉你如果用XbaI，就会把RBS切掉。 2，如果想一个氨基酸都不多，那就5‘端用NcoI，这样用enterokinase切，可以切得最干净，别的无论什么位点克隆都有可能多出几个氨基酸。 3，如果反了，重新设计含正确酶切位点的引物，PCR扩增后再切，就可以连了。 |
3楼2015-03-08 08:49:54
liuderong
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 310 (大学生)
- 金币: 8202.1
- 红花: 31
- 帖子: 582
- 在线: 142.1小时
- 虫号: 1882145
- 注册: 2012-07-07
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laqiwe(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-08 19:41:49
laqiwe: 金币+45, ★★★很有帮助 2015-03-09 08:39:17
感谢参与，应助指数 +1
laqiwe(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-03-08 19:41:49
laqiwe: 金币+45, ★★★很有帮助 2015-03-09 08:39:17
|
1.原始载体是没有RBS的，构建载体的人获得RBS序列后通过酶切连接的方式将它接到原始载体上，至于为什么选这个酶切位点就看构建者的习惯了。这个位置有酶切位点也比较方便载体的进一步改造。 2.你可以在你自己的基因后面接上蛋白酶切位点，比如“基因-蛋白酶切位点-his或s标签”形式，蛋白表达出来后用蛋白酶切掉标签。 3.这个问题我有些不太明白！酶切位点都是回文序列，正向和反向读都是一样的，你把它颠倒过来后它还是原来那个样所以我不清楚你说的颠倒是怎么回事。 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2015-03-07 23:27:44
wangyue115
木虫 (正式写手)
冰山火种
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 10481.7
- 帖子: 696
- 在线: 40小时
- 虫号: 292196
- 注册: 2006-11-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2015-03-08 08:53:00
laqiwe
铁虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 4.4
- 散金: 10
- 帖子: 515
- 在线: 116.7小时
- 虫号: 1793930
- 注册: 2012-05-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
5楼2015-03-08 12:09:41
wangyue115
木虫 (正式写手)
冰山火种
- 应助: 11 (小学生)
- 金币: 10481.7
- 帖子: 696
- 在线: 40小时
- 虫号: 292196
- 注册: 2006-11-03
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
6楼2015-03-09 01:48:49
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2015-03-09 12:12:54
781055707
木虫 (著名写手)
- 应助: 291 (大学生)
- 金币: 3118.2
- 散金: 46
- 红花: 19
- 帖子: 2030
- 在线: 579.3小时
- 虫号: 3046113
- 注册: 2014-03-13
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2015-03-09 12:17:32
99蜗牛99
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 193
- 散金: 20
- 帖子: 66
- 在线: 30.8小时
- 虫号: 3942913
- 注册: 2015-06-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2015-08-21 10:28:40
xuanrufeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 1307.8
- 帖子: 56
- 在线: 155.4小时
- 虫号: 3295786
- 注册: 2014-06-27
- 性别: GG
- 专业: 兽医传染病学
10楼2016-03-02 21:54:37
