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laqiwe

铁虫 (正式写手)

[求助] 关于经典分子生物学实验中用量的问题 已有2人参与

1.质粒试剂盒小提浓度一般为多少?
2.DNA电泳上样量为多少?Marker一般上样多少?
3.质粒双酶切DNA加量多少?
4.连接体系目的DNA和载体质量多少?
5.琼脂凝胶有那些种常见的上样孔,分别能上样多少体积?
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mosquito9246

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.质粒试剂盒小提浓度一般为多少?
最近要送样测序,技术那边说 满足150ng/ml就够了,一般我提能提到400~500mg/ml A260/A280 A260/A230 都在2左右

2.DNA电泳上样量为多少?Marker一般上样多少?
看具体是做什么实验,样品梳子规格 最大加样量 0.75 mm9 teeth 15μl ,0.75 mm17 teeth 6.5μl ,1.50 mm9 teeth 30μl ,1.50 mm 17 teeth 13μl,这个是我百度一下找到的,一般实验室的还真没具体查过大小·····就最小的 2μl就够了,mark也2μl。然后中等的梳子10μl mark 5μl 。最大的做胶回收的梳子,一次最多可以加样150 μl ,但是跑胶一般mark 5μl~8μl感觉足够啦。

3.质粒双酶切DNA加量多少?
这个没做过
4.连接体系目的DNA和载体质量多少?
没做过

5.琼脂凝胶有那些种常见的上样孔,分别能上样多少体积?
这个问题基本上第二个回答过啦~看你具体下一步要做什么,普通验证,用小孔 加样2μl就够了。胶回收要多一点,中等梳子加50μl,大梳子加150μl

如果有错误,欢迎纠错啊。
2楼2016-12-27 16:16:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 目的基因和载体的用量,这个用量是按比例进行的,一般遵循基因要比质粒多。基因和质粒的比在3-10倍之间。在这之间的比例是合适,做连接没有问题。2 一般确定基因和载体连接的用量问题,你可以选择将双酶切后的基因和质粒回收后同体积跑电泳,根据电泳条带的亮度来判断用量,这样做连接很不错。如果用nanodrop测定浓度,会存在一定的偏差,没有跑电泳确定来的直观。
3楼2016-12-27 20:11:17
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