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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于经典分子生物学实验中用量的问题
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laqiwe

铁虫 (正式写手)

[求助] 关于经典分子生物学实验中用量的问题 已有2人参与

1.质粒试剂盒小提浓度一般为多少？
2.DNA电泳上样量为多少？Marker一般上样多少？
3.质粒双酶切DNA加量多少？
4.连接体系目的DNA和载体质量多少？
5.琼脂凝胶有那些种常见的上样孔，分别能上样多少体积？
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1楼 2015-03-05 09:18:11
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mosquito9246

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1.质粒试剂盒小提浓度一般为多少？
最近要送样测序，技术那边说 满足150ng/ml就够了，一般我提能提到400~500mg/ml A260/A280 A260/A230 都在2左右

2.DNA电泳上样量为多少？Marker一般上样多少？
看具体是做什么实验，样品梳子规格 最大加样量 0.75 mm9 teeth 15μl ，0.75 mm17 teeth 6.5μl ，1.50 mm9 teeth 30μl ，1.50 mm 17 teeth 13μl，这个是我百度一下找到的，一般实验室的还真没具体查过大小·····就最小的 2μl就够了，mark也2μl。然后中等的梳子10μl mark 5μl 。最大的做胶回收的梳子，一次最多可以加样150 μl ，但是跑胶一般mark 5μl~8μl感觉足够啦。

3.质粒双酶切DNA加量多少？
这个没做过
4.连接体系目的DNA和载体质量多少？
没做过

5.琼脂凝胶有那些种常见的上样孔，分别能上样多少体积？
这个问题基本上第二个回答过啦~看你具体下一步要做什么，普通验证，用小孔 加样2μl就够了。胶回收要多一点，中等梳子加50μl，大梳子加150μl

如果有错误，欢迎纠错啊。
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2楼2016-12-27 16:16:42
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peitaokong

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1 目的基因和载体的用量，这个用量是按比例进行的，一般遵循基因要比质粒多。基因和质粒的比在3-10倍之间。在这之间的比例是合适，做连接没有问题。2 一般确定基因和载体连接的用量问题，你可以选择将双酶切后的基因和质粒回收后同体积跑电泳，根据电泳条带的亮度来判断用量，这样做连接很不错。如果用nanodrop测定浓度，会存在一定的偏差，没有跑电泳确定来的直观。
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3楼2016-12-27 20:11:17
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