应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » Klenow Fragment酶的用量问题
101/1返回列表
查看: 2131  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

phoebeww

铜虫 (小有名气)

[求助] Klenow Fragment酶的用量问题

我实验中需要用的这种酶，说明书中说到活性定义是”37℃30分钟内，催化10nmol dNTPs掺入到多聚核苷酸中所需要的酶量定义为一个活性单位“我现在要催化加入dNTPs的量是400nmol，应该加入的酶是多少U啊？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2012-10-17 15:25:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

361440594

木虫 (小有名气)

大神

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:25:18
照你这个说明书上的计算，加入量不就是400÷10=40U吗？然后看看Klenow聚合酶的浓度是10U/微升，还是5U/微升，算出所加的聚合酶的量。
赞一下 回复此楼
Hero
2楼2012-10-17 21:51:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ycyyvonne

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:24:08
是不是要用这么多哦，查下相关文献中用的是多少哟，我看到的有基本上有用10U的，我自己用过5U和2.5U，这个酶的活性还是比较高的
赞一下 回复此楼
3楼2012-10-18 08:29:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-18 18:41:22
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:27:19
理论上讲肯定是40单位37摄氏度30min内完全催化了。可是说明书上给的肯定是保守数据，而且楼主估计也是做检测分析的，自然没有必要用这么高的量。所以40单位是上限。
赞一下 回复此楼
4楼2012-10-18 09:05:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoebeww

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ycyyvonne at 2012-10-18 08:29:29
是不是要用这么多哦，查下相关文献中用的是多少哟，我看到的有基本上有用10U的，我自己用过5U和2.5U，这个酶的活性还是比较高的

我也觉得这样计算下来咋这么多呢……有人说不应该按照催化加入dNTPs的量计算酶的用量我也不知道是这样不……
赞一下 回复此楼
5楼2012-10-18 21:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoebeww

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 361440594 at 2012-10-17 21:51:16
照你这个说明书上的计算，加入量不就是400÷10=40U吗？然后看看Klenow聚合酶的浓度是10U/微升，还是5U/微升，算出所加的聚合酶的量。

这个我清楚，可是酶不是一般再需要过量5到10倍么……我买的酶也就是个100U啊
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-18 21:26:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoebeww

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shixiaba at 2012-10-18 09:05:32
理论上讲肯定是40单位37摄氏度30min内完全催化了。可是说明书上给的肯定是保守数据，而且楼主估计也是做检测分析的，自然没有必要用这么高的量。所以40单位是上限。

没有必要过量么？
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-18 21:28:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
phoebeww: 金币+2 2012-10-20 09:22:04
引用回帖:
7楼: Originally posted by phoebeww at 2012-10-18 21:28:07
没有必要过量么？...

我是做检测分析的，最近也正在做酶量的检测，按照这种思路肯定是不能过量啊。如果楼主是做别的应用需要完全催化，肯定那必然要过量了。40单位很多，不过根据自己底物的浓度，实际上用量不会太高的。
赞一下 回复此楼
8楼2012-10-19 09:08:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
phoebeww: 金币+2 2012-10-20 09:23:22
过量对实验有影响吗？
这个酶市面上买得挺便宜的了，而且一般都是删除了其外切酶活性的，所以我觉得过量点用以保证实验结果问题不大。
另外，在不同的反应体系中，受到不同因素的影响，酶的活力可能会有所不同，其活性单位可以做个参考，但若是严谨地进行操作，一般都是需要通过预实验后再确定的吧。
赞一下 回复此楼
小兵一个
9楼2012-10-19 09:42:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zijin999

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
10楼2014-12-14 18:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 phoebeww 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +21 yaoyewhu2008 2026-08-20 22/1100 2026-08-20 17:03 by yaoyewhu2008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭