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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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phoebeww

铜虫 (小有名气)

[求助] Klenow Fragment酶的用量问题

我实验中需要用的这种酶,说明书中说到活性定义是”37℃30分钟内,催化10nmol dNTPs掺入到多聚核苷酸中所需要的酶量定义为一个活性单位“我现在要催化加入dNTPs的量是400nmol,应该加入的酶是多少U啊?
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shixiaba

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-18 18:41:22
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:27:19
理论上讲肯定是40单位37摄氏度30min内完全催化了。可是说明书上给的肯定是保守数据,而且楼主估计也是做检测分析的,自然没有必要用这么高的量。所以40单位是上限。
4楼2012-10-18 09:05:32
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361440594

木虫 (小有名气)

大神

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:25:18
照你这个说明书上的计算,加入量不就是400÷10=40U吗?然后看看Klenow聚合酶的浓度是10U/微升,还是5U/微升,算出所加的聚合酶的量。
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2楼2012-10-17 21:51:16
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ycyyvonne

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
phoebeww: 金币+2 2012-10-18 21:24:08
是不是要用这么多哦,查下相关文献中用的是多少哟,我看到的有基本上有用10U的,我自己用过5U和2.5U,这个酶的活性还是比较高的
3楼2012-10-18 08:29:29
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phoebeww

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ycyyvonne at 2012-10-18 08:29:29
是不是要用这么多哦,查下相关文献中用的是多少哟,我看到的有基本上有用10U的,我自己用过5U和2.5U,这个酶的活性还是比较高的

我也觉得这样计算下来咋这么多呢……有人说不应该按照催化加入dNTPs的量计算酶的用量我也不知道是这样不……
5楼2012-10-18 21:25:05
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