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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
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1楼 2015-02-26 18:03:02
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jingquan

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ghqiu09 at 2015-02-28 09:43:48
首先十分感谢，1--4都应该不会是本质原因，第五个鉴定正确？？你意思是送测序？？？...

PCR扩增检测，双酶切检测，测序也可
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6楼2015-02-28 16:07:50
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sdhxwp

金虫 (小有名气)
会不会有噬菌体

[ 发自小木虫客户端 ]
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卧看满天云不动，一抹长风万里空。
2楼2015-02-26 18:14:33
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jingquan

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.仔细看分子克隆第二版中的步骤。
2.确定质粒松弛型严谨型，按照标准加入对应的氨苄或卡那的量，这在分子克隆书的后面有说明。
3.加入氨苄或卡那，用移液器吸取时，吹吸几次，确保在LB中。
4.用试管摇菌，倾斜角度要达到，否则转速低时，菌在液体中呈现静止的状态，菌、氨苄或卡那接触不到也达不到要求的。
5.平板上长出的菌落先划线，鉴定正确后，从线上挑取再接入液体中，虽然费事，但是降低了不确定因素。之后再分析上述原因。
祝好。
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3楼2015-02-27 00:28:42
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jingquan

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

另外，DH5a的菌落要大。JM109的菌落要小，板上都需要16小时左右，所以挑取后摇菌需要增加转速，延长时间。但是时间过长，易出现卫星菌落，挑菌要把握时间。
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4楼2015-02-27 00:32:31
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