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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR杂带原因分析及解决办法（小白求助）
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北欧神鱼

金虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR杂带原因分析及解决办法（小白求助） 已有3人参与

我用的巢式PCR，第一轮产物目标条带大小1325bp，第二轮是830bp，mark是2000bp，第二轮模板为第一轮产物10倍稀释物，电泳结果如图所示，最亮的条带应该为目标条带，三个阳性对照是不同稀释倍数的对照试验，但是在相同的位置有杂带出现，样本第一轮无条带，第二轮有目标条带。我想知道为何会出现这种情况，以及如何消除杂带？跪求大神指导！

巢式PCR杂带原因分析及解决办法（小白求助）
2.8结果.jpg
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1楼 2015-02-21 19:31:39
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
北欧神鱼(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-23 22:55:18
北欧神鱼: 金币+2, ★有帮助 2015-03-15 20:55:06
5`RACE的话，这个结果很正常啊

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2楼2015-02-21 23:29:12
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★
北欧神鱼: 金币+1, ★有帮助 2015-03-15 20:54:43
不知道你问题是什么？是我理解能力差还是你描述逻辑有问题呢。。。反正看图结果实验做的很好a。
如果你没有扩增出目的片段，我想体系中试剂是没问题的（由图得），而且巢式PCR本身很具特异性，，基本上应该酶啥问题呀，，，，还是从引物（和模板）上找原因
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-02-25 11:14:45
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
北欧神鱼: 金币+1, ★有帮助 2015-03-15 20:54:51
如果确定了那些事杂带的话 割胶回收可以只割去目的条带，然后以目的条带为模板 再次pcr 这样就ok了
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多多交流学习
4楼2015-02-26 09:35:24
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