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北欧神鱼

金虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR杂带原因分析及解决办法(小白求助) 已有3人参与

我用的巢式PCR,第一轮产物目标条带大小1325bp,第二轮是830bp,mark是2000bp,第二轮模板为第一轮产物10倍稀释物,电泳结果如图所示,最亮的条带应该为目标条带,三个阳性对照是不同稀释倍数的对照试验,但是在相同的位置有杂带出现,样本第一轮无条带,第二轮有目标条带。我想知道为何会出现这种情况,以及如何消除杂带?跪求大神指导!

巢式PCR杂带原因分析及解决办法(小白求助)
2.8结果.jpg
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w26150665w

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


北欧神鱼: 金币+1, 有帮助 2015-03-15 20:54:51
如果确定了那些事杂带的话 割胶回收可以只割去目的条带,然后以目的条带为模板 再次pcr 这样就ok了
多多交流学习
4楼2015-02-26 09:35:24
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查看全部 4 个回答

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
北欧神鱼(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-02-23 22:55:18
北欧神鱼: 金币+2, 有帮助 2015-03-15 20:55:06
5`RACE的话,这个结果很正常啊

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-02-21 23:29:12
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖


北欧神鱼: 金币+1, 有帮助 2015-03-15 20:54:43
不知道你问题是什么?是我理解能力差还是你描述逻辑有问题呢。。。反正看图结果实验做的很好a。
如果你没有扩增出目的片段,我想体系中试剂是没问题的(由图得),而且巢式PCR本身很具特异性,,基本上应该酶啥问题呀,,,,还是从引物(和模板)上找原因
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-02-25 11:14:45
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