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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 定量PCR和巢式PCR
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elinor7

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR和巢式PCR 已有2人参与

我想做实施荧光定量PCR，但是样本中核酸含量过低，只有巢式PCR能扩出来，有文献说可以将巢式PCR和定量PCR结合起来，先设计外套引物进行第一次PCR,然后将第一次PCR产物稀释作为定量PCR的模板，定量PCR用的是内套引物。我的问题是：这样的话是对第一轮PCR产物进行定量，那么怎么能知道原来样本中的我所检测的基因含量呢？哪位大侠指导一下啊
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1楼 2014-06-30 22:59:55
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-01 11:24:11
elinor7: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-07-28 15:20:28
你的问题和我的一样，但从我后来询问的结果看来，普通PCR如果用巢式，就不能再做定量PCR了，因为已经进行了一轮扩增之后，产物的量与原来模板的量已经不是一一对应的关系了
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人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
2楼2014-07-01 09:48:54
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taccycle

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-07-01 09:48:54
你的问题和我的一样，但从我后来询问的结果看来，普通PCR如果用巢式，就不能再做定量PCR了，因为已经进行了一轮扩增之后，产物的量与原来模板的量已经不是一一对应的关系了

说的对
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用心
3楼2014-07-01 15:13:50
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:28:29
赞同一楼的，你跑了PCR后再以产物跑定量PCR，都统一了 区分不出拷贝数来了！应该做不了荧光定量
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You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
4楼2014-07-20 20:51:13
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