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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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elinor7

新虫 (小有名气)

[求助] 定量PCR和巢式PCR 已有2人参与

我想做实施荧光定量PCR,但是样本中核酸含量过低,只有巢式PCR能扩出来,有文献说可以将巢式PCR和定量PCR结合起来,先设计外套引物进行第一次PCR,然后将第一次PCR产物稀释作为定量PCR的模板,定量PCR用的是内套引物。我的问题是:这样的话是对第一轮PCR产物进行定量,那么怎么能知道原来样本中的我所检测的基因含量呢?哪位大侠指导一下啊
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-01 11:24:11
elinor7: 金币+4, ★★★很有帮助 2014-07-28 15:20:28
你的问题和我的一样,但从我后来询问的结果看来,普通PCR如果用巢式,就不能再做定量PCR了,因为已经进行了一轮扩增之后,产物的量与原来模板的量已经不是一一对应的关系了
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
2楼2014-07-01 09:48:54
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taccycle

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2014-07-01 09:48:54
你的问题和我的一样,但从我后来询问的结果看来,普通PCR如果用巢式,就不能再做定量PCR了,因为已经进行了一轮扩增之后,产物的量与原来模板的量已经不是一一对应的关系了

说的对
用心
3楼2014-07-01 15:13:50
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未婚

金虫 (正式写手)

分子小生

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-07-21 08:28:29
赞同一楼的,你跑了PCR后再以产物跑定量PCR,都统一了 区分不出拷贝数来了!应该做不了荧光定量
You can't depend on luck, so you had better focus on the others!
4楼2014-07-20 20:51:13
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