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cresty

新虫 (初入文坛)

[求助] 发酵菌种正常,发酵时出问题 已有6人参与

最近做发酵,遇到个问题无奈啊,做20L大肠杆菌高密度发酵,发酵前检查菌种都没有问题,但是发酵后发现得到的菌不是我要的,密度很低,发酵过程中溶氧开始正常,之后升高降不下去,镜检菌株形态没问题,铺板没见噬菌体,电泳检查没有目的蛋白表达,发酵了几次时好时坏,发酵的菌是甘油菌化板挑形态正常单菌落做种子,验证过蛋白表达正常。怀疑过空气系统带入杂菌,检查清洗过,后来发酵几次也是时好时坏
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cresty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-02-05 20:04:16
我也有同样问题,原因一直找不到,就是遥瓶有蛋白,一到罐上就无蛋白。

蛋白有没有毒性,上罐发酵要控制好泄露表达,很容易出问题
9楼2015-02-06 19:17:21
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特异性免疫

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励热心应助! 2015-02-06 15:09:35
你是罐发酵的么,培养基消的时间够不够,染的是什么菌,罐子有没有渗漏,染得菌比需要的菌还多?
2楼2015-02-04 23:00:59
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cresty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 特异性免疫 at 2015-02-04 23:00:59
你是罐发酵的么,培养基消的时间够不够,染的是什么菌,罐子有没有渗漏,染得菌比需要的菌还多?

罐发酵,灭菌115度以上30nin,染的具体是什么菌还不清楚,发酵罐应该是不会漏的,镜检看形态像是大肠杆菌但是电泳几乎没有蛋白表达
3楼2015-02-04 23:12:17
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小花木兰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我也有同样问题,原因一直找不到,就是遥瓶有蛋白,一到罐上就无蛋白。
4楼2015-02-05 20:04:16
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wangju87c

银虫 (正式写手)

镜检的图片发个上来看看,到底是不是大肠杆菌,如果染的杂菌当然没有表达
哥已婚
5楼2015-02-06 09:46:18
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bigboy2050

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
噬菌体检查多做几遍,有时候不容易检出来。
职业无分贵贱,做事要有格调
6楼2015-02-06 09:52:10
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haoyu725527

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2015-02-06 15:09:52
1、培养基培养后状态什么样子?明显浑浊有异味肯定是染杂菌了,是这个问题的话那要从接种液开始着手,整体重新把关一下
2、灭菌温度可以调到121,时间20-30试试
7楼2015-02-06 10:13:19
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cresty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by haoyu725527 at 2015-02-06 10:13:19
1、培养基培养后状态什么样子?明显浑浊有异味肯定是染杂菌了,是这个问题的话那要从接种液开始着手,整体重新把关一下
2、灭菌温度可以调到121,时间20-30试试

发酵液没有没有明显异味,你说的浑浊是什么意思,培养基培养后本来就是浑的,发酵种子肯定不会有问题,每次发酵种子我都是分出一些检验的
8楼2015-02-06 19:04:16
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cresty

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小花木兰 at 2015-02-05 20:04:16
我也有同样问题,原因一直找不到,就是遥瓶有蛋白,一到罐上就无蛋白。

后来验证是空气过滤不行,发酵过程中染菌,更换了就好了,还额外加了二级过滤,不知道你是不是这样
10楼2015-04-03 17:32:46
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