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admision

新虫 (初入文坛)

[求助] 发酵过程中,菌种生长异常已有5人参与

我们上10L罐,灭菌后ph过低(正常灭菌后7.8),现在是6.8!跟罐实验,(培养基取自10L罐)在灭菌锅灭菌后ph7.7!培养基主要成分是玉米浆,甘油和无机盐
接种量2%,大肠杆菌!(现在操作与以往都是一样)!我们两个跟罐,一个是摇瓶A培养基取自10L罐在灭菌锅灭菌,一个是摇瓶B,实验室另外配置的培养基灭菌锅灭菌!
   目前结果是:
   1,od600角度:12小时10L罐od600才6,摇瓶跟罐A和B与罐子情况差不多!以往情况在发酵12h,od600达到10附近
   2,从酶活角度考虑:12小时10L罐及摇瓶A和B酶活差不多,为0.6!以往情况下12小时酶活可以达到1;从单位od600(酶活读数/od600读数)酶活来考虑,现在和以往是相当的
  3,ph变化:10L罐ph从6.8-5.7,摇瓶A和B从7.8到6.9!此次摇瓶跟罐与10L罐ph变化幅度是相差不大的!  以往情况ph变化幅度是7.8-6.6
  4,镜检菌体形态正常;用革兰氏染色,也未发现异常
   各位大侠,不知道是啥原因导致菌od600为什么那么偏低!若菌种出现问题了,但是从od600单位酶活考量(酶活/od600)与以往相差不大的!若是10L罐培养基出现问题了导致菌体生长慢,但是很难解释,摇瓶A和B(培养基肯定是正常的)为什么也生长慢!
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cx13033236

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
玉米浆放置时间太长了,重新换用新鲜的试试
5楼2014-04-07 14:25:53
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普通回帖

admision

新虫 (初入文坛)

补充一点:发酵液颜色,气味均正常!
2楼2014-04-06 11:14:32
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无为之人

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主文献杰出贡献优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
应该没有染菌,可能培养基有问题,不然灭菌后10L罐pH变化为什么那么大。

[ 发自小木虫客户端 ]
人生如戏,是在高潮和低谷之间跳动的旋律!
3楼2014-04-07 10:05:26
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mashuge

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我认为是否是你实消的温度控制波动大,还有你灭菌多久?玉米浆本身还有一些菌的灭菌时间长些,可以用灭过菌的玉米浆加到培养基中再实消。还有我觉得你菌种可能退化

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
珍惜自己现在拥有的,别等失去才追悔莫及,人只有经历了才会懂才会成熟,加油,未来的日子好好过!
4楼2014-04-07 12:39:32
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admision

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 无为之人 at 2014-04-07 10:05:26
应该没有染菌,可能培养基有问题,不然灭菌后10L罐pH变化为什么那么大。

培养基中玉米浆换刚出厂没多久的!10L罐灭菌121,30min,操作跟以前一样,灭菌前调制的ph也是一样的!但是灭菌后ph差异太大!以前相同操作,10L罐灭菌后ph是7.8附近!昨天是6.8!这个,不知道咋搞的!
若10L罐因为灭菌温度问题导致培养基营养成分损耗严重,但是摇瓶A,B在灭菌锅里灭菌,121度,20min!我们以前都是这样灭菌的,很正常的!摇瓶A,Bod增长也很是缓慢!
6楼2014-04-07 21:09:06
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无为之人

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主文献杰出贡献优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by admision at 2014-04-07 21:09:06
培养基中玉米浆换刚出厂没多久的!10L罐灭菌121,30min,操作跟以前一样,灭菌前调制的ph也是一样的!但是灭菌后ph差异太大!以前相同操作,10L罐灭菌后ph是7.8附近!昨天是6.8!这个,不知道咋搞的!
若10L罐因为 ...

重复一遍再试试,不行换原料试试
人生如戏,是在高潮和低谷之间跳动的旋律!
7楼2014-04-07 21:12:44
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admision

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mashuge at 2014-04-07 12:39:32
我认为是否是你实消的温度控制波动大,还有你灭菌多久?玉米浆本身还有一些菌的灭菌时间长些,可以用灭过菌的玉米浆加到培养基中再实消。还有我觉得你菌种可能退化
...

谢谢
温度是121,30min实消!
菌种实甘油管的,保存时间小半年(这种子是进行过产能验证的,应该不是退化的)
8楼2014-04-07 21:18:45
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admision

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cx13033236 at 2014-04-07 14:25:53
玉米浆放置时间太长了,重新换用新鲜的试试

用的就是最新批号的!
而且车间就是用这一批玉米浆!生产很是稳定的!
9楼2014-04-07 21:21:30
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admision

新虫 (初入文坛)

我们部门的菌种室感染过一次噬菌体(判断是温和噬菌体)!进行彻底的消毒后,改用原先保存的菌种!(菌种甘油管保存在另外一个地方)
是不是环境中还有残存的噬菌体导致这些异常的出现
10楼2014-04-07 21:28:18
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