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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于噬菌体侵染细菌
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lihao1988903

金虫 (正式写手)

[求助] 关于噬菌体侵染细菌

最近做的两次微生物发酵罐发酵都被噬菌体侵染了。我们做的是30L 大肠杆菌发酵，接种到发酵罐一切正常，菌种生长到一定OD后，溶氧就急剧上升并OD下降到1一下，菌液变清亮。因为第一次污染后专门对环境和设备又做了次消毒处理，结果第二次还是污染了。我想请问各位大虾，噬菌体会在什么时候侵染了大肠杆菌？侵染了大肠杆菌后多长时间才会释放出来使OD下降？因为接种以后，发酵罐没有开过口，会被污染吗？如果是滤器进去的为啥刚接种是没有呢？各位大虾分析下是什么时候被污染噬菌体的呢？
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1楼 2012-06-28 13:40:57
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回帖置顶 ( 共有1个 )

371522029

金虫 (正式写手)

小鱼儿

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+6, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-06-28 20:09:33
amisking: MicEPI+1 2012-06-28 20:09:41
首先我建议你不能这么武断的认为是噬菌体。接种的时候接种口用棉花蘸酒精点燃，然后接种。生长到OD值还没有下降，或者刚刚下降不久马上进行一次补料，补料后观察OD值是否继续下降，补料的培养基是很浓的，控制好体积，并灭好菌。补料后如果发现OD值只有少量上升，并且没维持多久就继续飞速下降那么就可能是污染了，补料后OD值上升，溶解氧下降，称现一定规律，则表明之前是培养基耗尽。
如果证明了有很大可能是污染为了确认，你可以先用没有污染的菌做涂布，菌浓度大培养使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂几个点（用接种环）的怀疑污染了的培养基，培养，看看是否会出现溶菌现象。（既原来看到完整的菌苔，在接种后出现了空的溶菌斑）如果出现了溶菌现象则确实证明了是噬菌体。如果是噬菌体的话就比较讨厌了。需要对所有可能的物品进行消毒。（不是灭菌）包括房间，容器，器皿等等。
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3楼2012-06-28 19:38:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

178925426

新虫 (初入文坛)
这原因就多了去，
     之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升（不要怀疑缺糖这种低级原因），OD直接从接近8降到1以下，有时是小罐很好，转接到大罐立马就挂，还有时是发酵着，长得很慢，离心不干爽，每周至少5罐，发酵了6个多月，什么样的问题都碰到了，和噬菌体做了长期的斗争。
     很显然你是感染了噬菌体，但原因是多方面的：
     种子带噬菌体；
     氨苄带噬菌体；   
     消罐后有尾压掉0现象；
     接种时瓶口带菌；
     接种时通气不足；
     ……
     别以为种子带噬菌体很好决解，如果是溶原性侵染会让你头大，有时死，有时不死，让你一切分析、找原因都困难。
     一开始我是从头查到尾，逐处检验有没有噬菌斑，种子里查噬菌斑没有才上罐，罐子实消后不接种两天后镜检无菌才上罐，上罐后更是每小时都无菌取样检测噬菌斑，以为种子检测到噬菌斑了就没事，后来还是死。
      唉，后来发现先是感染烈性噬菌体，死得准时，死得快，后来种子一一检测，没烈性噬菌体再上罐，成功率上升不少，但有时死，有时不死，有时是半死不活（长的慢，菌浓低，离心效果不好）。从买菌种到分子过程重新仔细做，才完事了。
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14楼2012-08-14 20:04:29
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421095972

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+3, 鼓励交流 2012-07-01 22:27:10
1.不要自溶了就说是噬菌体，你做了噬菌体检测了没有，没做就不要找借口。
2.确定不是噬菌体污染后，考虑下是不是菌种老化的原因，菌种长期保存最好放在液氮中。
3.另外培养基碳氮比，过程控制不好也都会产生细胞不生长和自溶的
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6楼2012-06-29 08:47:43
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wwdxx2004

金虫 (正式写手)
我也做大肠 也染过噬菌体 我的菌是溶源性菌 在发酵过程中可能是某个条件激发了溶源性。一般种子罐不会裂解，接发酵以后才会裂解。你的菌是溶源性菌吗？
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8楼2012-07-01 15:26:55
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普通回帖

kedaxiaoyu
2楼2012-06-28 14:55:51
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李晓宏东华

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-01 22:26:56
，你可以先用没有污染的菌做涂布，菌浓度大培养使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂几个点（用接种环）的怀疑污染了的培养基，培养，看看是否会出现溶菌现象。（既原来看到完整的菌苔，在接种后出现了空的溶菌斑）如果出现了溶菌现象则确实证明了是噬菌体。如果是噬菌体的话就比较讨厌了。需要对所有可能的物品进行消毒。（不是灭菌）包括房间，容器，器皿等等。
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4楼2012-06-28 20:23:27
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李晓宏东华

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

，你可以先用没有污染的菌做涂布，菌浓度大培养使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂几个点（用接种环）的怀疑污染了的培养基，培养，看看是否会出现溶菌现象。（既原来看到完整的菌苔，在接种后出现了空的溶菌斑）如果出现了溶菌现象则确实证明了是噬菌体。如果是噬菌体的话就比较讨厌了。需要对所有可能的物品进行消毒。（不是灭菌）包括房间，容器，器皿等等。
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5楼2012-06-28 20:24:08
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lihao1988903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 421095972 at 2012-06-29 08:47:43
1.不要自溶了就说是噬菌体，你做了噬菌体检测了没有，没做就不要找借口。
2.确定不是噬菌体污染后，考虑下是不是菌种老化的原因，菌种长期保存最好放在液氮中。
3.另外培养基碳氮比，过程控制不好也都会产生细胞不 ...

我说是噬菌体不是没有依据的，我们做了噬菌斑检测，确实是噬菌体。而且发酵一定时期后溶氧急剧上升到90%，OD测定不到1这种显现基本都是噬菌体的，而且镜检菌液也发现全是菌体碎片。补充一下，以前做发酵罐都没有自溶的。
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7楼2012-06-29 14:48:51
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匿名

用户注销 (知名作家)
★ ★
rainwander: 金币+2, 鼓励交流 2012-07-01 22:27:30
本帖仅楼主可见
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9楼2012-07-01 20:53:07
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lihao1988903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wwdxx2004 at 2012-07-01 15:26:55
我也做大肠 也染过噬菌体 我的菌是溶源性菌 在发酵过程中可能是某个条件激发了溶源性。一般种子罐不会裂解，接发酵以后才会裂解。你的菌是溶源性菌吗？

不是啊，这个事情也属于偶发事件。
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10楼2012-07-02 08:27:17
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