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lihao1988903金虫 (正式写手)
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[求助]
关于噬菌体侵染细菌
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| 最近做的两次微生物发酵罐发酵都被噬菌体侵染了。我们做的是30L 大肠杆菌发酵，接种到发酵罐一切正常，菌种生长到一定OD后，溶氧就急剧上升并OD下降到1一下，菌液变清亮。因为第一次污染后专门对环境和设备又做了次消毒处理，结果第二次还是污染了。我想请问各位大虾，噬菌体会在什么时候侵染了大肠杆菌？侵染了大肠杆菌后多长时间才会释放出来使OD下降？因为接种以后，发酵罐没有开过口，会被污染吗？如果是滤器进去的为啥刚接种是没有呢？各位大虾分析下是什么时候被污染噬菌体的呢？ |
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这原因就多了去， 之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升（不要怀疑缺糖这种低级原因），OD直接从接近8降到1以下，有时是小罐很好，转接到大罐立马就挂，还有时是发酵着，长得很慢，离心不干爽，每周至少5罐，发酵了6个多月，什么样的问题都碰到了，和噬菌体做了长期的斗争。 很显然你是感染了噬菌体，但原因是多方面的： 种子带噬菌体； 氨苄带噬菌体； 消罐后有尾压掉0现象； 接种时瓶口带菌； 接种时通气不足； …… 别以为种子带噬菌体很好决解，如果是溶原性侵染会让你头大，有时死，有时不死，让你一切分析、找原因都困难。 一开始我是从头查到尾，逐处检验有没有噬菌斑，种子里查噬菌斑没有才上罐，罐子实消后不接种两天后镜检无菌才上罐，上罐后更是每小时都无菌取样检测噬菌斑，以为种子检测到噬菌斑了就没事，后来还是死。 唉，后来发现先是感染烈性噬菌体，死得准时，死得快，后来种子一一检测，没烈性噬菌体再上罐，成功率上升不少，但有时死，有时不死，有时是半死不活（长的慢，菌浓低，离心效果不好）。从买菌种到分子过程重新仔细做，才完事了。 |
14楼2012-08-14 20:04:29
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6楼2012-06-29 08:47:43
8楼2012-07-01 15:26:55
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2楼2012-06-28 14:55:51
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金虫 (正式写手)
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amisking: MicEPI+1 2012-06-28 20:09:41
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首先我建议你不能这么武断的认为是噬菌体。接种的时候接种口用棉花蘸酒精点燃，然后接种。生长到OD值还没有下降，或者刚刚下降不久马上进行一次补料，补料后观察OD值是否继续下降，补料的培养基是很浓的，控制好体积，并灭好菌。补料后如果发现OD值只有少量上升，并且没维持多久就继续飞速下降那么就可能是污染了，补料后OD值上升，溶解氧下降，称现一定规律，则表明之前是培养基耗尽。 如果证明了有很大可能是污染为了确认，你可以先用没有污染的菌做涂布，菌浓度大培养使得形成菌苔，然后在菌苔表面涂几个点（用接种环）的怀疑污染了的培养基，培养，看看是否会出现溶菌现象。（既原来看到完整的菌苔，在接种后出现了空的溶菌斑）如果出现了溶菌现象则确实证明了是噬菌体。如果是噬菌体的话就比较讨厌了。需要对所有可能的物品进行消毒。（不是灭菌）包括房间，容器，器皿等等。 |
3楼2012-06-28 19:38:32
4楼2012-06-28 20:23:27
5楼2012-06-28 20:24:08
lihao1988903
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7楼2012-06-29 14:48:51
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9楼2012-07-01 20:53:07
lihao1988903
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