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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于噬菌体侵染细菌
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lihao1988903

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-07-01 20:53:07
细菌发酵染噬菌体很麻烦的，“第一次污染后专门对环境和设备又做了次消毒处理，结果第二次还是污染了”，可能是有灭菌不到位的地方（空调源头、相关人员肯定要做啦），你可以试试连续一周每天对环境和设备进行强力灭 ...

细菌火焰接种是最普遍的吧，再说别的接种技术即复杂又不成熟。
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11楼2012-07-02 08:29:45
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匿名

用户注销 (知名作家)
★
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 21:38:24
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12楼2012-07-02 21:18:10
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amaoni

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lihao1988903: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-07-04 15:34:24
噬菌体在发酵各周期均可能污染，通过你的描述看，不是种子污染，也不是过滤空气污染，可能是环境污染，一般环境污染噬菌体要进行彻底消毒处理，可以先休息一段时间，消毒处理一周左右，而且平时也要注意定期消毒。噬菌体由侵染到释放是个快速的过程，一般快的十几二十分钟，慢的也只有四五十分钟，菌液OD会迅速下降变澄清。
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13楼2012-07-03 22:13:09
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178925426

新虫 (初入文坛)
这原因就多了去，
     之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升（不要怀疑缺糖这种低级原因），OD直接从接近8降到1以下，有时是小罐很好，转接到大罐立马就挂，还有时是发酵着，长得很慢，离心不干爽，每周至少5罐，发酵了6个多月，什么样的问题都碰到了，和噬菌体做了长期的斗争。
     很显然你是感染了噬菌体，但原因是多方面的：
     种子带噬菌体；
     氨苄带噬菌体；   
     消罐后有尾压掉0现象；
     接种时瓶口带菌；
     接种时通气不足；
     ……
     别以为种子带噬菌体很好决解，如果是溶原性侵染会让你头大，有时死，有时不死，让你一切分析、找原因都困难。
     一开始我是从头查到尾，逐处检验有没有噬菌斑，种子里查噬菌斑没有才上罐，罐子实消后不接种两天后镜检无菌才上罐，上罐后更是每小时都无菌取样检测噬菌斑，以为种子检测到噬菌斑了就没事，后来还是死。
      唉，后来发现先是感染烈性噬菌体，死得准时，死得快，后来种子一一检测，没烈性噬菌体再上罐，成功率上升不少，但有时死，有时不死，有时是半死不活（长的慢，菌浓低，离心效果不好）。从买菌种到分子过程重新仔细做，才完事了。
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14楼2012-08-14 20:04:29
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lisacico

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 421095972 at 2012-06-29 08:47:43
1.不要自溶了就说是噬菌体，你做了噬菌体检测了没有，没做就不要找借口。
2.确定不是噬菌体污染后，考虑下是不是菌种老化的原因，菌种长期保存最好放在液氮中。
3.另外培养基碳氮比，过程控制不好也都会产生细胞不 ...

请教一下你们噬菌体都是怎么检测的？谢谢
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没有不可能
15楼2013-03-13 16:25:37
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ghy281

木虫 (初入文坛)
可以可定时噬菌体污染，1  必须对环境进行彻底的消毒，设备全部拆开进行清理和消毒。2  最好更换菌种，使用不同的菌种发酵一段时间；3   菌种污染噬菌体就非常麻烦，要纯化菌种。种子室要彻底消毒。4  使用甲醛或戊二醛消毒设备环境熏蒸。筛选抗噬菌体的菌种，工作慢但必须做好；5  日常活菌液严格管理，必须灭火处理，不能随意乱倒入下水道。。。6  人员操作要求更严格，不要人员乱走动，减少人员带来的染菌机会。
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16楼2014-07-11 14:34:05
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-29 14:48:51
我说是噬菌体不是没有依据的，我们做了噬菌斑检测，确实是噬菌体。而且发酵一定时期后溶氧急剧上升到90%，OD测定不到1这种显现基本都是噬菌体的，而且镜检菌液也发现全是菌体碎片。补充一下，以前做发酵罐都没有自 ...

染了噬菌体，那么你的发酵液变稀了吗？
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17楼2016-03-08 16:08:30
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monoshen

金虫 (著名写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 178925426 at 2012-08-14 20:04:29
这原因就多了去，
     之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升（不要怀疑缺糖这种低级原因），OD直接从接近8降到1以下，有时是小罐很好，转接到大罐立马就挂，还有时是发酵着，长得很慢，离心不干爽，每周至少5 ...

半死不活是怎么样的，开始就半死不活还是长到一定浓度后才半死不活，我现在在做也是刚开始是烈性噬菌体，后面甲醛消后，现在都是在30OD后就半死不活的，噬菌斑都没有，环境也没有噬菌斑，没什么原因了
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彼岸
18楼2019-07-17 22:07:31
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