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lihao1988903

金虫 (正式写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by shangyukuan at 2012-07-01 20:53:07
细菌发酵染噬菌体很麻烦的,“第一次污染后专门对环境和设备又做了次消毒处理,结果第二次还是污染了”,可能是有灭菌不到位的地方(空调源头、相关人员肯定要做啦),你可以试试连续一周每天对环境和设备进行强力灭 ...

细菌火焰接种是最普遍的吧,再说别的接种技术即复杂又不成熟。
11楼2012-07-02 08:29:45
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匿名

用户注销 (知名作家)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 21:38:24
本帖仅楼主可见
12楼2012-07-02 21:18:10
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amaoni

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
lihao1988903: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-07-04 15:34:24
噬菌体在发酵各周期均可能污染,通过你的描述看,不是种子污染,也不是过滤空气污染,可能是环境污染,一般环境污染噬菌体要进行彻底消毒处理,可以先休息一段时间,消毒处理一周左右,而且平时也要注意定期消毒。噬菌体由侵染到释放是个快速的过程,一般快的十几二十分钟,慢的也只有四五十分钟,菌液OD会迅速下降变澄清。
13楼2012-07-03 22:13:09
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178925426

新虫 (初入文坛)

这原因就多了去,
     之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升(不要怀疑缺糖这种低级原因),OD直接从接近8降到1以下,有时是小罐很好,转接到大罐立马就挂,还有时是发酵着,长得很慢,离心不干爽,每周至少5罐,发酵了6个多月,什么样的问题都碰到了,和噬菌体做了长期的斗争。
     很显然你是感染了噬菌体,但原因是多方面的:
     种子带噬菌体;
     氨苄带噬菌体;   
     消罐后有尾压掉0现象;
     接种时瓶口带菌;
     接种时通气不足;
     ……
     别以为种子带噬菌体很好决解,如果是溶原性侵染会让你头大,有时死,有时不死,让你一切分析、找原因都困难。
     一开始我是从头查到尾,逐处检验有没有噬菌斑,种子里查噬菌斑没有才上罐,罐子实消后不接种两天后镜检无菌才上罐,上罐后更是每小时都无菌取样检测噬菌斑,以为种子检测到噬菌斑了就没事,后来还是死。
      唉,后来发现先是感染烈性噬菌体,死得准时,死得快,后来种子一一检测,没烈性噬菌体再上罐,成功率上升不少,但有时死,有时不死,有时是半死不活(长的慢,菌浓低,离心效果不好)。从买菌种到分子过程重新仔细做,才完事了。
14楼2012-08-14 20:04:29
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lisacico

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 421095972 at 2012-06-29 08:47:43
1.不要自溶了就说是噬菌体,你做了噬菌体检测了没有,没做就不要找借口。
2.确定不是噬菌体污染后,考虑下是不是菌种老化的原因,菌种长期保存最好放在液氮中。
3.另外培养基碳氮比,过程控制不好也都会产生细胞不 ...

请教一下你们噬菌体都是怎么检测的?谢谢
没有不可能
15楼2013-03-13 16:25:37
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ghy281

木虫 (初入文坛)

可以可定时噬菌体污染,1  必须对环境进行彻底的消毒,设备全部拆开进行清理和消毒。2  最好更换菌种,使用不同的菌种发酵一段时间;3   菌种污染噬菌体就非常麻烦,要纯化菌种。种子室要彻底消毒。4  使用甲醛或戊二醛消毒设备环境熏蒸。筛选抗噬菌体的菌种,工作慢但必须做好;5  日常活菌液严格管理,必须灭火处理,不能随意乱倒入下水道。。。6  人员操作要求更严格,不要人员乱走动,减少人员带来的染菌机会。
16楼2014-07-11 14:34:05
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bugliuyun

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by lihao1988903 at 2012-06-29 14:48:51
我说是噬菌体不是没有依据的,我们做了噬菌斑检测,确实是噬菌体。而且发酵一定时期后溶氧急剧上升到90%,OD测定不到1这种显现基本都是噬菌体的,而且镜检菌液也发现全是菌体碎片。补充一下,以前做发酵罐都没有自 ...

染了噬菌体,那么你的发酵液变稀了吗?
17楼2016-03-08 16:08:30
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monoshen

金虫 (著名写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 178925426 at 2012-08-14 20:04:29
这原因就多了去,
     之前我发酵经常是发酵到2-3小时DO快速上升(不要怀疑缺糖这种低级原因),OD直接从接近8降到1以下,有时是小罐很好,转接到大罐立马就挂,还有时是发酵着,长得很慢,离心不干爽,每周至少5 ...

半死不活是怎么样的,开始就半死不活还是长到一定浓度后才半死不活,我现在在做也是刚开始是烈性噬菌体,后面甲醛消后,现在都是在30OD后就半死不活的,噬菌斑都没有,环境也没有噬菌斑,没什么原因了
彼岸
18楼2019-07-17 22:07:31
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