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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » E.COLI发酵罐出现很奇怪的现象！
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fushxmy

金虫 (正式写手)

[求助] E.COLI发酵罐出现很奇怪的现象！

我的发酵是产生有机酸的，这几次的发酵很奇怪，种子一接进去之后，很快DO就从100%下降到30%，小于1小时（以前的发酵是至少需要3小时），之后DO时而升到50%以上时而维持在设定的30%左右（反复好几次）。加入IPTG之后，pH开始下降，碱泵开始启动，这个过程只维持了2小时左右，之后pH开始上升并超过设定的7.0，之后pH就不会再下降，直到发酵结束。之后是染过噬菌体，但现在并没有噬菌体出现。我已经转化过好几次菌种，每次都出现同样的问题。不知道是不是培养基的问题，因为我现在的种子是用的2XYT， 16g/l trptone, 10g/l yeast extract, 5 g/L NaCl，以前培养基用的是文献中的。
大家有什么好的建议，谢谢了！

fermentor.jpg
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秦皇汉武
1楼 2013-02-06 10:21:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我关注的是发酵pH上升
你用的碱是氨水吗？
有可能是发酵结束，氨挥发后溶入培养液内，造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过，但具体原因我也没探究明白
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IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
2楼2013-02-06 15:15:56
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
怀疑是是宿主菌的问题。可以的话，能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我，具体分析一下。。。。。
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4楼2013-02-07 08:01:52
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fakeandff

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能你的菌种不纯，菌种之间产生了竞争抑制，我以前也出现了同样的问题，后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。
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6楼2013-02-07 10:01:14
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by fakeandff at 2013-02-07 10:01:14
有可能你的菌种不纯，菌种之间产生了竞争抑制，我以前也出现了同样的问题，后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。

谢谢，我也有这种怀疑，准备把菌种重新纯化再试一试吧。另外，我还准备用别的菌再试一下。希望是染菌问题。
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秦皇汉武
8楼2013-02-07 10:09:34
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qixiachang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会是碳源不够？ 毕竟微生物首先保证自身生存的。尝试下用补碳源控制来拉低DO,也许会有效果
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9楼2013-02-07 10:24:39
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shishia

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌种问题：菌种有氨基酸效应，即肉汤中的氨基酸消耗达到一定值后，菌种不能自身启动新的氮源代谢机制，由于饥饿，自身收缩，导致OD下降，接种后菌体生长越快，这种现象越明显，出现的几率也越多。
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10楼2013-02-07 10:45:24
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普通回帖

fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-02-06 15:15:56
我关注的是发酵pH上升
你用的碱是氨水吗？
有可能是发酵结束，氨挥发后溶入培养液内，造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过，但具体原因我也没探究明白

我用的是10M NaOH
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秦皇汉武
3楼2013-02-06 23:04:16
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fushxmy at 2013-02-06 23:04:16
我用的是10M NaOH...

5楼2013-02-07 09:10:58
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fushxmy

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xl0071334 at 2013-02-07 08:01:52
怀疑是是宿主菌的问题。可以的话，能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我，具体分析一下。。。。。

我用的菌是BW25113，质粒是pZE载体。谢谢
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秦皇汉武
7楼2013-02-07 10:08:23
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