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fushxmy

金虫 (正式写手)

[求助] E.COLI发酵罐出现很奇怪的现象!

我的发酵是产生有机酸的,这几次的发酵很奇怪,种子一接进去之后,很快DO就从100%下降到30%,小于1小时(以前的发酵是至少需要3小时),之后DO时而升到50%以上时而维持在设定的30%左右(反复好几次)。加入IPTG之后,pH开始下降,碱泵开始启动,这个过程只维持了2小时左右,之后pH开始上升并超过设定的7.0,之后pH就不会再下降,直到发酵结束。之后是染过噬菌体,但现在并没有噬菌体出现。我已经转化过好几次菌种,每次都出现同样的问题。不知道是不是培养基的问题,因为我现在的种子是用的2XYT, 16g/l trptone, 10g/l yeast extract, 5 g/L NaCl,以前培养基用的是文献中的。
大家有什么好的建议,谢谢了!

fermentor.jpg
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秦皇汉武
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我关注的是发酵pH上升
你用的碱是氨水吗?
有可能是发酵结束,氨挥发后溶入培养液内,造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过,但具体原因我也没探究明白
IwanttoaccompanyyoumorethanyouknowbutIcann't
2楼2013-02-06 15:15:56
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xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
怀疑是是宿主菌的问题。可以的话,能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我,具体分析一下。。。。。
4楼2013-02-07 08:01:52
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fakeandff

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能你的菌种不纯,菌种之间产生了竞争抑制,我以前也出现了同样的问题,后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。
6楼2013-02-07 10:01:14
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fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by fakeandff at 2013-02-07 10:01:14
有可能你的菌种不纯,菌种之间产生了竞争抑制,我以前也出现了同样的问题,后来重新将菌种纯化才正常的。你的菌种可能在操作过程中污染了。

谢谢,我也有这种怀疑,准备把菌种重新纯化再试一试吧。另外,我还准备用别的菌再试一下。希望是染菌问题。
秦皇汉武
8楼2013-02-07 10:09:34
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qixiachang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
会不会是碳源不够? 毕竟微生物首先保证自身生存的。尝试下用补碳源控制来拉低DO,也许会有效果
9楼2013-02-07 10:24:39
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shishia

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
菌种问题:菌种有氨基酸效应,即肉汤中的氨基酸消耗达到一定值后,菌种不能自身启动新的氮源代谢机制,由于饥饿,自身收缩,导致OD下降,接种后菌体生长越快,这种现象越明显,出现的几率也越多。
10楼2013-02-07 10:45:24
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普通回帖

fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangxingc at 2013-02-06 15:15:56
我关注的是发酵pH上升
你用的碱是氨水吗?
有可能是发酵结束,氨挥发后溶入培养液内,造成pH值上升。我做保加利亚乳杆菌发酵时遇到过,但具体原因我也没探究明白

我用的是10M NaOH
秦皇汉武
3楼2013-02-06 23:04:16
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zhangxingc

铁杆木虫 (著名写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by fushxmy at 2013-02-06 23:04:16
我用的是10M NaOH...

5楼2013-02-07 09:10:58
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fushxmy

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xl0071334 at 2013-02-07 08:01:52
怀疑是是宿主菌的问题。可以的话,能不能将你使用的宿主菌的基因型和载体信息发给我,具体分析一下。。。。。

我用的菌是BW25113,质粒是pZE载体。谢谢
秦皇汉武
7楼2013-02-07 10:08:23
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