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酿酒酵母做同源重组遇到的问题
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| 我要在酿酒酵母的某个基因A的中间加一个tag，然后设计了一个片段，分别是A的左端，tag，A的右端，Leu的Promoter，Leu和A基因的下游区域。然后进行同源重组，挑选带有Leu能力的菌株，进行抽提基因PCR，用的是A基因的左右两端引物。在PCR产物测序结果中，有阳性克隆，但是是重峰，就是两个基因都存在。相应的对B和C基因进行类似的操作，也是重峰，这是为什么？PCR体系不是问题。也用MK板确定为单倍体。 |
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