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tianba

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[求助] 酿酒酵母做同源重组遇到的问题

我要在酿酒酵母的某个基因A的中间加一个tag,然后设计了一个片段,分别是A的左端,tag,A的右端,Leu的Promoter,Leu和A基因的下游区域。然后进行同源重组,挑选带有Leu能力的菌株,进行抽提基因PCR,用的是A基因的左右两端引物。在PCR产物测序结果中,有阳性克隆,但是是重峰,就是两个基因都存在。相应的对B和C基因进行类似的操作,也是重峰,这是为什么?PCR体系不是问题。也用MK板确定为单倍体。
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