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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 有关同源重组同源臂问题。。。
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 有关同源重组同源臂问题。。。 已有3人参与

本人最近在做同源重组，PCR扩增出上下游各1000bp同源臂，但扩增出的上下游同源序列一直存在1~2个碱基的突变，请问这样存在2个碱基突变的同源臂可以用于之后的重组吗？忘重组高手指教，谢谢！！！
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1楼 2014-09-15 19:48:29
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:01
下游同源序列一直存在1~2个碱基的突变，重组没问题，同源臂的长度不一定要那么长，扩增长度短一点，突变自然就少一些。
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2楼2014-09-16 08:44:29
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:11
看实验是否重要，一般而言是可以接受的
但是如果是需要同框之类的处理时，建议还是不要用了
还有你用的什么酶扩增啊 1kb都有错的  
建议你用phusion 或者Q5  都不贵的  50ul体系一次6块钱吧  一般咱们30ul足够回收了
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3楼2014-09-18 21:18:06
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:22
同源臂500左右就行了，长了容易突变
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男人，就要对自己狠一点！
4楼2014-09-19 15:47:58
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