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汕头大学海洋科学接受调剂
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liulugang

木虫 (小有名气)

[求助] 有关同源重组同源臂问题。。。 已有3人参与

本人最近在做同源重组,PCR扩增出上下游各1000bp同源臂,但扩增出的上下游同源序列一直存在1~2个碱基的突变,请问这样存在2个碱基突变的同源臂可以用于之后的重组吗?忘重组高手指教,谢谢!!!
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yandz680717

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:01
下游同源序列一直存在1~2个碱基的突变,重组没问题,同源臂的长度不一定要那么长,扩增长度短一点,突变自然就少一些。
2楼2014-09-16 08:44:29
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kuenyunliu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
liulugang(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:11
看实验是否重要,一般而言是可以接受的
但是如果是需要同框之类的处理时,建议还是不要用了
还有你用的什么酶扩增啊 1kb都有错的  
建议你用phusion 或者Q5  都不贵的  50ul体系一次6块钱吧  一般咱们30ul足够回收了
3楼2014-09-18 21:18:06
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崔士元

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


liulugang(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-19 16:22:22
同源臂500左右就行了,长了容易突变
男人,就要对自己狠一点!
4楼2014-09-19 15:47:58
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