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[求高手支招] 过柱子纯化复合体时,标签蛋白降解
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集胞藻6803,想纯化得到蛋白A所在的复合体。 在得到表达蛋白A-HIS-YFP的藻株后,破碎细胞,过镍柱纯化该复合体。跑native gel转二相检测复合体的各亚基,结果正常,即只在复合体的分子量处有信号。 但在用yfp和his抗体去杂的时候,结果是:不仅在复合体的位置上有信号,还在更小分子量的位置上有信号,且小分子量处的信号更强。 是不是A-HIS-YFP蛋白容易从复合体中掉落下来,如果掉落为什么不是形成单体,而是形成了一个小复合体呢? 有没有人遇到过类似的情况,或看过相关的文献,不胜感激! |
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