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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 小分子蛋白交联之后如何分离，如何确定两种蛋白的连接效率？高效液相色谱分析可否
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)

[求助] 小分子蛋白交联之后如何分离，如何确定两种蛋白的连接效率？高效液相色谱分析可否 已有2人参与

我的实验主要是将一种小分蛋白与某种蛋白交联之后，怎样将未交联的小分子去除？以及如何分析是否所有的蛋白都交联上了小分子物质
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1楼 2014-12-08 14:19:30
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七夕小巫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是小分子还是小蛋白？小分子可以用超滤，小蛋白可能要跑胶或者色谱
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2楼2014-12-08 14:55:28
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 七夕小巫 at 2014-12-08 14:55:28
你是小分子还是小蛋白？小分子可以用超滤，小蛋白可能要跑胶或者色谱

哦，小蛋白1000道尔顿左右，如何验证我的蛋白是否与要交联的物质连接上了呢
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3楼2014-12-08 15:19:02
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)
有知道哪里可以做色谱分析的吗
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4楼2014-12-08 15:20:07
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刘小益

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这种蛋白如果需要活性纯化的化，可以使用SEC处理，很容易将小分子蛋白除去~~对于是否交联的确定可以用SDS-PAGE。当然如果你纯化了蛋白，质谱分析很容易的~~~
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实验室小打杂
5楼2014-12-08 21:31:50
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七夕小巫

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

恩，楼上正解，质谱可以测出来，交联上分子量增加1000，如果交联上不一个还可以按分子量大致推算一下交联量
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6楼2014-12-08 23:47:57
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 刘小益 at 2014-12-08 21:31:50
这种蛋白如果需要活性纯化的化，可以使用SEC处理，很容易将小分子蛋白除去~~对于是否交联的确定可以用SDS-PAGE。当然如果你纯化了蛋白，质谱分析很容易的~~~

高效液相可以吗？凝胶排阻色谱
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7楼2014-12-09 08:51:11
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 七夕小巫 at 2014-12-08 23:47:57
恩，楼上正解，质谱可以测出来，交联上分子量增加1000，如果交联上不一个还可以按分子量大致推算一下交联量

有没有更简便一些的方法,？我们目前做不了质谱分析，您知道哪里可以做吗？
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8楼2014-12-09 08:59:32
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刘小益

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by zhengxichun at 2014-12-09 08:51:11
高效液相可以吗？凝胶排阻色谱...

SEC就是指的凝胶排阻色谱，如果你的交联量比较大，这个应该也可以~~但是凝胶排阻色谱的分辨率很低。当然你也可以这么做，将初始蛋白与交联后蛋白混合后走一个，如果出现两个峰那应该能说明你的东西接上去了
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实验室小打杂
9楼2014-12-09 09:05:46
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zhengxichun

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 刘小益 at 2014-12-09 09:05:46
SEC就是指的凝胶排阻色谱，如果你的交联量比较大，这个应该也可以~~但是凝胶排阻色谱的分辨率很低。当然你也可以这么做，将初始蛋白与交联后蛋白混合后走一个，如果出现两个峰那应该能说明你的东西接上去了...

谢谢！
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10楼2014-12-09 09:26:40
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