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shuibingyue

新虫 (小有名气)

[求助] 磷酸化蛋白的激酶如何确定

本人研究的蛋白质谱检测可被磷酸化，如何能寻找到它的激酶呢？希望有经验的同仁指点一下啦
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1楼 2013-02-25 10:26:14
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-02-25 13:41:21
shuibingyue: 金币+5, ★★★很有帮助, 意见很有意义 2013-02-26 18:03:11
几乎是蛋白都可以被磷酸化，你可以用软件分析下，这个蛋白可能被那些激酶磷酸化。但是研究重点还是磷酸化对这个蛋白功能有没有影响，没有这个前提，堆积数据没有意义
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2楼2013-02-25 11:53:00
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shuibingyue

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-25 11:53:00
几乎是蛋白都可以被磷酸化，你可以用软件分析下，这个蛋白可能被那些激酶磷酸化。但是研究重点还是磷酸化对这个蛋白功能有没有影响，没有这个前提，堆积数据没有意义

谢谢您的回复，已知转染该蛋白（蛋白A）的基因会导致另一个蛋白的磷酸化水平升高，有没有什么方法可以确定是此蛋白的磷酸化形式还是普通形式起了作用呢？此蛋白有没有可能是一种激酶呢，有办法验证吗？
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3楼2013-02-26 18:10:56
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by shuibingyue at 2013-02-26 18:10:56
谢谢您的回复，已知转染该蛋白（蛋白A）的基因会导致另一个蛋白的磷酸化水平升高，有没有什么方法可以确定是此蛋白的磷酸化形式还是普通形式起了作用呢？此蛋白有没有可能是一种激酶呢，有办法验证吗？...

可以，首先鉴定这个蛋白是不是激酶，体外表达纯化这个蛋白，在做放射自显影，就可以鉴定是不是激酶。如果是激酶就可以鉴定这个蛋白是不是可以磷酸化另外另一个蛋白
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4楼2013-02-26 18:27:51
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shuibingyue

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-26 18:27:51
可以，首先鉴定这个蛋白是不是激酶，体外表达纯化这个蛋白，在做放射自显影，就可以鉴定是不是激酶。如果是激酶就可以鉴定这个蛋白是不是可以磷酸化另外另一个蛋白...

请教一下，不用特定的底物就可以鉴定一个蛋白是不是激酶吗，还有它的工作环境怎么设置呢，是有特定的试剂盒可以鉴定任何种类的激酶吗？
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5楼2013-02-28 08:46:47
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
shuibingyue: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-03-04 15:50:36
引用回帖:
5楼: Originally posted by shuibingyue at 2013-02-28 08:46:47
请教一下，不用特定的底物就可以鉴定一个蛋白是不是激酶吗，还有它的工作环境怎么设置呢，是有特定的试剂盒可以鉴定任何种类的激酶吗？...

任何一个激酶都是自己的激酶，所以，如果是激酶，那么用一些鉴定磷酸化的实验，都可以证明他是不是激酶。这些实验protocol很多，可以自己去找找。
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6楼2013-02-28 19:22:52
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shuibingyue

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by peakg7 at 2013-02-28 19:22:52
任何一个激酶都是自己的激酶，所以，如果是激酶，那么用一些鉴定磷酸化的实验，都可以证明他是不是激酶。这些实验protocol很多，可以自己去找找。...

所以激酶都是自己的激酶吗？会不会太绝对了，那信号通路里的激酶是怎么调控的呢，都能自磷酸化那会不会乱套啊。证明是不是激酶的文献您有没有现成的，我没有找到。谢谢
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7楼2013-03-04 17:38:52
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peakg7

新虫 (小有名气)
体外过表达纯化这个蛋白，然后做放射自显影实验室，就可以了。
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8楼2013-03-06 18:57:38
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darkarrow

新虫 (初入文坛)
寻找某蛋白的上游 kinase 其实是很难的，这个过程耗时较长，运气成分较大。最初可以通过软件分析被磷酸化的sequnce中是否含有被鉴定出的motif，mit有个相关在线软件，一些文章应用过，准确信还行，如果比较幸运能得到上游信息，就可以通过inhibitor来试。如果没有，只能通过 cross-link  后的co -ip.  或yeast hybrid。还是推荐先找出被磷酸化后的生物学功能为主

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-03-07 19:08:05
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631433209

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by darkarrow at 2013-03-07 19:08:05
寻找某蛋白的上游 kinase 其实是很难的，这个过程耗时较长，运气成分较大。最初可以通过软件分析被磷酸化的sequnce中是否含有被鉴定出的motif，mit有个相关在线软件，一些文章应用过，准确信还行，如果比较幸运能得 ...

求助一下，您说的那个在线软件叫什么，有网址链接吗？
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10楼2013-12-05 20:35:04
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