| 查看: 1827 | 回复: 17 | |||
[交流]
【求助/交流】抗癌药物-凋亡-western
|
|||
|
大家好，我是western得新手，最近在做一个化合物的抗癌作用，关于促进凋亡的，在做MAPK 通路时，发现了些问题，请大家帮忙解决一下吧，谢谢了 （1）western做出来的结果随着浓度增加，不仅磷酸化的JNK，p38增加，而且总的JNK，p38也升高，这样正常吗？ （2）结果还显示随着浓度增加，磷酸化的ERK1/2降低，总的ERK1/2增加，这样正常吗？ 谢谢大家了。。。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有131人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 抗癌药物研发人员招聘----百济神州
已经有6人回复
- 【求助/交流】药物致组织细胞凋亡的caspase活性检测需要多大的组织？（昆虫、动物）
已经有9人回复
- 【求助/交流】细胞水平 筛选活性单体
已经有4人回复
- 【有奖活动】~~~秀出您的美图~~~
已经有28人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
双一流南京医科大学招计算机、AI、统计、生物信息等方向26年9月入学博士
+1/176
-
华中科技大学龚江研究员课题组诚招博士研究生、科研助理和博士后
+2/126
-
广州，真诚男征女
+1/80
-
中国海洋大学与中国水产科学研究院 联合培养 专硕 食品加工与安全
+1/78
-
坐标北京不异地
+1/74
-
最新看到一个观点：说高校教师的斩杀线是青基和面上
+1/69
-
王志博教授课题组招收硕士研究生(本招收信息长期有效)
+2/46
-
深圳大学李天任博士课题组研究生招生信息
+1/26
-
南科大夏海平院士-深大张平玉课题组联合招聘博士后
+1/26
-
深容SCI智能体四大模块：Method, Introduction, Discussion, Abstract
+1/11
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/10
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘-有机化学，金属有机
+1/10
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘-有机化学，金属有机
+1/9
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/8
-
天津大学化学系吴立朋课题组申请考核制博士招生/博后招聘
+1/6
-
武汉大学郭宇铮教授课题组招收博士后等研究人员【先进封装/芯片/人工智能等方向】
+1/5
-
长春工业大学机电工程学院韩玲教授招收审核制2026年秋季入学博士生
+1/5
-
北京师范大学与企业联合招聘博士后、全职、兼职人员
+1/1
-
合肥工业大学 多智能体方向 2026 级博士招生
+1/1
-
探究TGF-β在癌症免疫调控中的作用机制|肿瘤
+1/1
2楼2011-03-23 09:15:42
4楼2011-03-23 09:36:34
5楼2011-03-25 08:24:00
6楼2011-03-25 13:38:58
7楼2011-03-25 16:47:56
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+8): good 2011-03-26 08:46:30
lv840716(金币+5): 2011-03-26 13:30:28
dhd997(金币+8): good 2011-03-26 08:46:30
lv840716(金币+5): 2011-03-26 13:30:28
|
有变化是好事啊，就怕没有变化呢。首先你要确定这个变化的稳定性，你的需要重复实验三次左右，每次run gel的时候 loading control和target protein都要在一张膜上进行western，要保证你的loading control bands很平，这样才能证明结果的可信性。 确定结果可信后，这个结果就是很不错的了。总蛋白浓度的变化和磷酸化水平的变化不一致是很正常的现象。总蛋白浓度的升高可以有两种方式：一种是转录水平的提高，这个不能用western来证明，需要做RTPCR来检测mRNA水平。另一种是转录后调控造成的总蛋白浓度变化，比如negative regulateor或者positive regulateor蛋白的浓度或活性的变化造成的，或者是蛋白本身进行转录后修饰后在细胞内half-life period的变化。 而磷酸化其实就是蛋白转录后修饰的一种，一般的是在你加药物后改变了细胞内环境，触发了某条信号通路，激活了一些上游的激酶，这些激酶进而磷酸化了下游的蛋白。这个过程跟总蛋白浓度的变化没有必然的联系的。磷酸化的作用也是多元化的，有些是改变蛋白的生物活性，有些是改变蛋白的稳定性和细胞内定位。 要解释你的现象你需要对相关的信号通路有足够的了解，而且光一个western是不够的，你可能需要对你怀疑的相关信号蛋白都做western，或者做一些RTPCR实验。 |
8楼2011-03-26 08:33:58
9楼2011-03-26 08:57:47
10楼2011-03-26 13:35:14
★ ★ ★ ★ ★ ★
lv840716(金币+5): 谢谢 2011-03-27 09:10:10
dhd997(金币+6): good 2011-03-27 16:25:22
lv840716(金币+5): 谢谢 2011-03-27 09:10:10
dhd997(金币+6): good 2011-03-27 16:25:22
|
在讨论药物对肿瘤细胞的signal pathway影响的时候哪有什么一般而言啊。。。肿瘤细胞本身就是disorder的，而药品更是种类繁多，除非你看到别人跟你用一样的cell line。一样的treatment condition。否则就不要轻易否定自己的实验结果。总蛋白水平和转录后修饰反应是信号转导研究中很普遍的两个研究对象了，MAPK我没自己动手检测过不敢说，我自己做的P53pathway就是很好的例子，受外源胁迫信号刺激后，细胞的反应往往都是总蛋白浓度和转录后修饰同时变化的。。这个是很常见的。很多文章发现某药物对蛋白总浓度和磷酸化同时有影响或是某一个有影响另一个无影响的都只是只给个result，都不做过多的discussion了，因为这种波动性太常见了。。真要解释起来却又很难，大多数都是一些猜测和假说了。 |
13楼2011-03-26 15:31:51
14楼2011-03-27 09:13:30
15楼2011-03-27 14:49:22
16楼2011-03-27 15:13:56
17楼2011-03-28 11:58:07
18楼2012-04-25 13:33:41
简单回复
zyxme3楼
2011-03-23 09:23
回复
zyxme11楼
2011-03-26 13:58
回复
lv840716(金币+1):谢谢参与
xiaovae12楼
2011-03-26 14:42
回复
lv840716(金币+1):谢谢参与
