| 查看: 2006 | 回复: 17 | |||
[交流]
【求助/交流】抗癌药物-凋亡-western
|
|||
|
大家好，我是western得新手，最近在做一个化合物的抗癌作用，关于促进凋亡的，在做MAPK 通路时，发现了些问题，请大家帮忙解决一下吧，谢谢了 （1）western做出来的结果随着浓度增加，不仅磷酸化的JNK，p38增加，而且总的JNK，p38也升高，这样正常吗？ （2）结果还显示随着浓度增加，磷酸化的ERK1/2降低，总的ERK1/2增加，这样正常吗？ 谢谢大家了。。。。。。。 |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 抗癌药物研发人员招聘----百济神州
已经有6人回复
- 【求助/交流】药物致组织细胞凋亡的caspase活性检测需要多大的组织？（昆虫、动物）
已经有9人回复
- 【求助/交流】细胞水平 筛选活性单体
已经有4人回复
- 【有奖活动】~~~秀出您的美图~~~
已经有28人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
湖北人在北京漂泊
+1/274
-
寻找真诚的女朋友，坐标北京
+1/264
-
山东征女友，坐标济南
+1/171
-
诚邀申报 | 潍坊学院“绿色催化新材料与光化学转化山东省工程研究中心“开放课题
+2/166
-
香港城市大学（东莞）雷进程博士课题组招聘研究助理
+1/76
-
硕士招生
+1/32
-
西工大国家级青年人才诚聘微尺度传热方向博后/科研助理
+1/32
-
汕头大学理学院生物与医药专硕调剂信息
+1/31
-
重庆大学电气学院刘坤教授招收2026年入学博士生（农学或图像处理相关专业背景）
+1/29
-
北京理工大学沈国震教授课题组招聘柔性智能电子方向博士后
+2/28
-
广东石油化工学院，化学工程，招收调剂生，线上面试
+2/18
-
上海交通大学-电气工程学院-高温超导磁体-2026年秋季入学全日制博士生招聘
+1/16
-
坐标广州，征女友
+2/14
-
湖南大学张旺课题组硕士/博士/博士后招聘
+1/13
-
黑龙江科技大学 化工招收调剂 07理学 08工学 09农学 均可。
+3/12
-
四川大学华西医院核医学临床研究室博士后招聘
+1/8
-
2026年博士招生—中国林业科学研究院---土壤微生物生态学方向
+1/8
-
同济大学环境学院 肖倩特聘研究员课题组 招聘2027级硕士/博士
+1/6
-
急招！（211/双一流）郑州大学化工学院 院士团队 招收2026年9月份入学博士生一名
+1/3
-
PD-1 Blocking抗体如何重启抗肿瘤免疫？
+1/1
2楼2011-03-23 09:15:42
4楼2011-03-23 09:36:34
5楼2011-03-25 08:24:00
6楼2011-03-25 13:38:58
7楼2011-03-25 16:47:56
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+8): good 2011-03-26 08:46:30
lv840716(金币+5): 2011-03-26 13:30:28
dhd997(金币+8): good 2011-03-26 08:46:30
lv840716(金币+5): 2011-03-26 13:30:28
|
有变化是好事啊，就怕没有变化呢。首先你要确定这个变化的稳定性，你的需要重复实验三次左右，每次run gel的时候 loading control和target protein都要在一张膜上进行western，要保证你的loading control bands很平，这样才能证明结果的可信性。 确定结果可信后，这个结果就是很不错的了。总蛋白浓度的变化和磷酸化水平的变化不一致是很正常的现象。总蛋白浓度的升高可以有两种方式：一种是转录水平的提高，这个不能用western来证明，需要做RTPCR来检测mRNA水平。另一种是转录后调控造成的总蛋白浓度变化，比如negative regulateor或者positive regulateor蛋白的浓度或活性的变化造成的，或者是蛋白本身进行转录后修饰后在细胞内half-life period的变化。 而磷酸化其实就是蛋白转录后修饰的一种，一般的是在你加药物后改变了细胞内环境，触发了某条信号通路，激活了一些上游的激酶，这些激酶进而磷酸化了下游的蛋白。这个过程跟总蛋白浓度的变化没有必然的联系的。磷酸化的作用也是多元化的，有些是改变蛋白的生物活性，有些是改变蛋白的稳定性和细胞内定位。 要解释你的现象你需要对相关的信号通路有足够的了解，而且光一个western是不够的，你可能需要对你怀疑的相关信号蛋白都做western，或者做一些RTPCR实验。 |
8楼2011-03-26 08:33:58
9楼2011-03-26 08:57:47
10楼2011-03-26 13:35:14
★ ★ ★ ★ ★ ★
lv840716(金币+5): 谢谢 2011-03-27 09:10:10
dhd997(金币+6): good 2011-03-27 16:25:22
lv840716(金币+5): 谢谢 2011-03-27 09:10:10
dhd997(金币+6): good 2011-03-27 16:25:22
|
在讨论药物对肿瘤细胞的signal pathway影响的时候哪有什么一般而言啊。。。肿瘤细胞本身就是disorder的，而药品更是种类繁多，除非你看到别人跟你用一样的cell line。一样的treatment condition。否则就不要轻易否定自己的实验结果。总蛋白水平和转录后修饰反应是信号转导研究中很普遍的两个研究对象了，MAPK我没自己动手检测过不敢说，我自己做的P53pathway就是很好的例子，受外源胁迫信号刺激后，细胞的反应往往都是总蛋白浓度和转录后修饰同时变化的。。这个是很常见的。很多文章发现某药物对蛋白总浓度和磷酸化同时有影响或是某一个有影响另一个无影响的都只是只给个result，都不做过多的discussion了，因为这种波动性太常见了。。真要解释起来却又很难，大多数都是一些猜测和假说了。 |
13楼2011-03-26 15:31:51
14楼2011-03-27 09:13:30
15楼2011-03-27 14:49:22
16楼2011-03-27 15:13:56
17楼2011-03-28 11:58:07
18楼2012-04-25 13:33:41
简单回复
zyxme3楼
2011-03-23 09:23
回复
zyxme11楼
2011-03-26 13:58
回复
lv840716(金币+1):谢谢参与
xiaovae12楼
2011-03-26 14:42
回复
lv840716(金币+1):谢谢参与
