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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » q-PCR连续实验，发现同一样品、同一基因ct值呈等差数列下降
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sujiyan

银虫 (小有名气)

[求助] q-PCR连续实验，发现同一样品、同一基因ct值呈等差数列下降 已有2人参与

各位高手，近日我对动物组织样品中的mRNA做q-PCR，因为样本量多，就只能采用拼版的方法，每块96-well板上，做27个样品，每样品3复孔，共81孔，然后在每块板的相同3个孔上，做相同样品、相同基因（Actin），进行校正。可是连续实验4块板后发现，校正孔的Ct成等差数列递减，就是17.0，16.8,16.6,16.4的下去，溶解曲线正常，觉得好奇怪，请问各位有碰过这样的状况吗？
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1楼 2015-01-24 12:49:58
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
模板用过之后存放在哪
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ControlMyself
2楼2015-01-26 09:42:37
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
ct值呈等差数列下降说明你的标准曲线很好，值得信任！
赞一下(1人) 回复此楼
人生贵在行动，迟疑不决时，不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-26 20:36:31
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sujiyan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2015-01-26 09:42:37
模板用过之后存放在哪

由于是连续实验，所以都是操作时放在冰上，然后等待过程中在4℃存放。我也查过，被稀释的模板，在4℃存放一周内应该没问题。
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4楼2015-01-27 00:13:05
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sujiyan

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-26 20:36:31
ct值呈等差数列下降说明你的标准曲线很好，值得信任！

首先感谢你的关注。不过我不是在做标曲呢，而是同一个样品，同一个基因，在连续的几块板上做出来的结果呈等差数列下降呢
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5楼2015-01-27 00:14:46
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sujiyan

银虫 (小有名气)
咨询过工程师，说是这就是方法学本来存在的误差，所以叫我调节阈值线，让这几个校正孔的值接近就好
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6楼2015-01-27 00:15:56
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