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sujiyan

银虫 (小有名气)

[求助] q-PCR连续实验,发现同一样品、同一基因ct值呈等差数列下降 已有2人参与

各位高手,近日我对动物组织样品中的mRNA做q-PCR,因为样本量多,就只能采用拼版的方法,每块96-well板上,做27个样品,每样品3复孔,共81孔,然后在每块板的相同3个孔上,做相同样品、相同基因(Actin),进行校正。可是连续实验4块板后发现,校正孔的Ct成等差数列递减,就是17.0,16.8,16.6,16.4的下去,溶解曲线正常,觉得好奇怪,请问各位有碰过这样的状况吗?
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爱睡猪

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
模板用过之后存放在哪
ControlMyself
2楼2015-01-26 09:42:37
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飞约疯人院

专家顾问 (著名写手)

科学怪人

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
ct值呈等差数列下降说明你的标准曲线很好,值得信任!
人生贵在行动,迟疑不决时,不妨先迈出小小一步。
3楼2015-01-26 20:36:31
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sujiyan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 爱睡猪 at 2015-01-26 09:42:37
模板用过之后存放在哪

由于是连续实验,所以都是操作时放在冰上,然后等待过程中在4℃存放。我也查过,被稀释的模板,在4℃存放一周内应该没问题。
4楼2015-01-27 00:13:05
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sujiyan

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 飞约疯人院 at 2015-01-26 20:36:31
ct值呈等差数列下降说明你的标准曲线很好,值得信任!

首先感谢你的关注。不过我不是在做标曲呢,而是同一个样品,同一个基因,在连续的几块板上做出来的结果呈等差数列下降呢
5楼2015-01-27 00:14:46
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sujiyan

银虫 (小有名气)

咨询过工程师,说是这就是方法学本来存在的误差,所以叫我调节阈值线,让这几个校正孔的值接近就好
6楼2015-01-27 00:15:56
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