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银虫 (小有名气)

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[求助] 如何用PCR方法扩增全基因已有1人参与

我想用PCR的方法扩增一段500左右的片段，但是我没有模板，除了去公司合成外还有什么办法吗！我听说重叠区域扩增法可以做到，那这个引物是如何设计的

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1楼 2015-01-07 09:35:15

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titus0805

铁虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
mtyx: 金币+1, ★有帮助 2015-01-07 12:37:18

如果你根本没有这500多bp序列的模板，只能找人去要，或者找公司合成，别无他法。
重叠pcr是用来把两段序列拼成一段的，也就是说，如果你有这500多bp的序列，只是其中一部分在模板1中，另一部分在模板2中，那么就可以用重叠pcr来扩增这段序列。
设计引物你最好查文献，还要摸索，因为这个重叠pcr不算好做的实验。
引物其实就是把你要拼接那一端的引物连起来。连段序列的引物分别为F1\R1\F2\R2,就把R1和F2连着设计成一个40bp左右的引物

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