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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » qPCR结果异常
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eskimo_0_0

铁虫 (初入文坛)

[求助] qPCR结果异常 已有2人参与

半个月前做了一次qPCR 结果良好，如图1，今天用同批cDNA重新做了另外几个引物的qPCR,却没有检测结果，重新做了一遍依旧如此，如图2 3 ，重复做了一遍还是一样，内参用的是同样的引物，今天也没有结果，两次的模板都是当天稀释的，请教大家可能的原因。
cDNA保存在-20℃冰箱，应该是比较稳定的吧。

qPCR结果异常
91782883.snap.jpg


qPCR结果异常-1
47790473.snap.jpg


qPCR结果异常-2
68416479.snap.jpg
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1楼 2015-01-07 09:24:11
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:41:31
换个PCR试剂盒，引物也换新的（用灭菌后的双蒸水稀释）用完后放负20，楼主图一，起峰前的一团就不正常（你能P出来也算是运气了)，阴性是一定要做的呀。
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采菊东篱下，悠然见南山。
2楼2015-01-07 13:45:14
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xygcdmr

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:41:34
可能原因1.模板怎么稀释的？可能是模板的问题；2.用新的引物
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3楼2015-01-07 14:15:19
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eskimo_0_0

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 781055707 at 2015-01-07 13:45:14
换个PCR试剂盒，引物也换新的（用灭菌后的双蒸水稀释）用完后放负20，楼主图一，起峰前的一团就不正常（你能P出来也算是运气了)，阴性是一定要做的呀。

试剂用的是新打开的takara试剂，引物除了内参都是新溶解的，起峰前面不应该有一团呀。。。我每次做都有，还以为是正常的呢。。。
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4楼2015-01-08 23:26:53
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eskimo_0_0

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xygcdmr at 2015-01-07 14:15:19
可能原因1.模板怎么稀释的？可能是模板的问题；2.用新的引物

模板用depc水稀释了10倍，引物也是新溶解的呀
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5楼2015-01-08 23:27:21
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xygcdmr

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by eskimo_0_0 at 2015-01-08 23:27:21
模板用depc水稀释了10倍，引物也是新溶解的呀...

模板稀释10倍可能不能放太久吧。可以加个新模板试试。看下qPCR 软件里的Multicomponent Plot 和Raw Data Plot是什么样子就知道了
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6楼2015-01-09 23:37:41
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