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1700基因的克隆 已有3人参与
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最近在克隆一个1700bp的基因，引物是根据转录组序列设计的。因为是全长， 所以引物没办法多选，只能是起始密码子开始，到终止密码子，但是无论怎么P，都P不出来~然后又做了一个3’RACE，得到了终止密码子后面的序列，根据3‘RACE的序列设计下游引物，依然P不出来~ 但是单加一个全长正（反）引物，与一个中间位置的反（正）引物一起P，可以扩增上游1300bp，下游1200bp的片段， 曾经也拿Mix P出过一次1700的全长，但是因为是Mix，有错配，不能用~ 以后拿LA Taq酶P，就再也消失不见了、、、、 但是能证明转录组序列是对的~ 求各位大神指教，这是为什么呢？下一步该怎么做呢？ 是引物的问题呢？还是模板有高级结构呢？ |
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