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tianti_121

新虫 (小有名气)

[求助] 谁知道我这个PCR怎么是这样的啊?该如何调整? 已有6人参与

如图,我对乳酸菌进行了菌液PCR出现了这样的结果,请问这是怎么回事?该如何调整?

谁知道我这个PCR怎么是这样的啊?该如何调整?
菌液PCR-20141225.jpg
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puresnowlqin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-12-26 16:45:02
菌液PCR容易出现很多杂质,可以提个基因组然后再PCR会好很多。
最喜欢的就是最好的。
2楼2014-12-25 16:42:27
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★
tianti_121(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:34:00
您好 你的图上显示的结果是拖尾太严重啦 我认为可能的原因是
1)模板:反应体系中的模板量太浓了,而且不纯吧,(菌液直接PCR应该不行的),可能会造成拖带
2)buffer:buffer一般酶问题的,只要合适就行
3) 退火温度:不知道您的退火温度是多少呢,普通Taq酶或者是热启动酶55℃就可以了(可以适当提高的)
4)酶:酶是关键,但是你的这个实验结果来看,酶应该是酶问题的,(酶的用量不要太多哦)
5)循环次数30个循环即可不能太多
原因一个一个分析 总会得到结果哒 希望对你有帮助
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
8楼2015-01-07 10:36:00
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fry000

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:34:07
1.引物设计特异性够吗
2.模板至少稀释20倍
3.循环减少到25次
4.适当升高退火温度

希望有帮助
enjoyourlife
9楼2015-01-16 13:39:16
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普通回帖

tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by puresnowlqin at 2014-12-25 16:42:27
菌液PCR容易出现很多杂质,可以提个基因组然后再PCR会好很多。

好的,十分感谢!
3楼2014-12-25 16:47:20
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枭翔

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 鼓励发帖积极交流。 2014-12-26 16:45:14
我觉的是你的模板加多了,就是菌液作为模板加多了。不知楼主用了多少作为模板?减少以后再尝试一下
4楼2014-12-25 20:33:08
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tianti_121

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 枭翔 at 2014-12-25 20:33:08
我觉的是你的模板加多了,就是菌液作为模板加多了。不知楼主用了多少作为模板?减少以后再尝试一下

0.5微升呢
5楼2014-12-27 17:21:16
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


tianti_121(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:33:41
模板不是很纯,浓度也太高了,可以稀释之后再加样的。
你的日子如何,你的力量也必如何!
6楼2014-12-29 15:38:07
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


tianti_121(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-16 17:33:50
纯化一下目的片段就好看了,还有楼主你的TBE该换了,用1乘的配胶,这样你的MARK也会很好看。
采菊东篱下,悠然见南山。
7楼2015-01-06 14:58:42
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qaz139687

新虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by fry000 at 2015-01-16 13:39:16
1.引物设计特异性够吗
2.模板至少稀释20倍
3.循环减少到25次
4.适当升高退火温度

希望有帮助

着么看设计的引物特异性够不够?
10楼2015-01-16 15:20:03
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