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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 纯化后蛋白没有活性
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kjchao0316

新虫 (初入文坛)

[交流] 纯化后蛋白没有活性 已有4人参与

最近纯化一个蛋白，大小35KD左右，蛋白是包涵体表达，洗涤后经SDS-PAGE验证蛋白大小和纯度都不是问题，但是不论用8M尿素、Tris-NaOH、0.5%SLS溶解后测活性，基本没活性，求教应该怎么处理
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1楼 2014-12-16 15:22:16
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小小cool

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
包涵体肯定没有活性的，需要复性

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-12-16 18:52:31
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成都连接流体

新虫 (正式写手)
稷安生物超哥？
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3楼2014-12-25 17:35:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
摸索表达条件，尽量活性表达在上清液。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2014-12-25 22:16:44
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kjchao0316

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小小cool at 2014-12-16 18:52:31
包涵体肯定没有活性的，需要复性

复兴后也没有活性，变性条件下向让蛋白的作用表位都暴露，但是和目的片段已然没有活性
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5楼2014-12-31 13:20:32
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kjchao0316

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2014-12-25 22:16:44
摸索表达条件，尽量活性表达在上清液。

低温也表达过，始终是包涵体。。。。
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6楼2014-12-31 13:21:46
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kjchao0316

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 成都连接流体 at 2014-12-25 17:35:07
稷安生物超哥？

段？
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7楼2014-12-31 13:22:55
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小小cool

金虫 (正式写手)
★
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建议用pcold-sumo试试

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8楼2014-12-31 20:42:14
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小小cool

金虫 (正式写手)
★
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就是这个质粒，http://www.miaolingbio.com/cn/product/plasmid/485.html

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2014-12-31 23:56:00
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dt_lilin

铜虫 (初入文坛)
★
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如果包涵体复性也没有活性，那建议你对表达条件进行优化，从上清中提取试试

可以到这个网站上看看——上清蛋白表达服务（http://www.detaibio.com/bacteria ... rantee-service.html）
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10楼2015-01-16 09:30:22
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