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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化时涂板阴性对照也长菌
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莘1莘2学3子4

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化时涂板阴性对照也长菌 已有2人参与

近期涂板长的菌落一直像图片中这样，原以为是菌液浓度太高，就连接后加600ul无AMP液体培养基摇床150rpm摇半小时，不离心，取菌液20ul涂板仍然是这样。后来考虑是倒板加AMP时温度太高，昨天倒板时专门用温度计测温到55度时才加AMP，用50ul菌液涂板，另外直接用TOP10感受态细胞做阴性对照，结果仍然像图中那样。昨天我还做了一组对照，就是涂板时加20ulAMP和50ul菌液，可能是没混匀的缘故，平板中间没有菌落，边缘有一些，还是连成片。
以上就是我对问题的描述，希望有遇到相同问题的高人给以指点，看看是什么缘故，如果在涂板时另加AMP，加多少合适？是按照培养基的体积（20ml左右）加，还是按照菌液的体积加合适。还有就是制板时我做了蓝白斑筛选，如果图片中长的都是杂菌的话，不应该显蓝色吗？希望高手指点。

连接转化时涂板阴性对照也长菌
20141203_084350.jpg
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1楼 2014-12-03 09:20:36
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-05 13:04:05
你最好换新的AMP试试，终浓度（100mg/L），出现这种情况一般是抗生素失效了。
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hehe
3楼2014-12-03 17:49:09
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-05 13:04:00
明显是菌浓度太高，用300ul的LB稀释一下再涂。
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永远相信未知的总是美好的！
2楼2014-12-03 17:30:46
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莘1莘2学3子4

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-12-03 17:49:09
你最好换新的AMP试试，终浓度（100mg/L），出现这种情况一般是抗生素失效了。

倒板时是按照100mg/L的浓度加的AMP,当时温度是55度，可是阴性对照能长出斑，后来我在原培养基上直接加20ulAMP，长出来的斑就只有几个，这证明AMP是没有失效的啊
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4楼2014-12-05 10:36:28
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