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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做DGGE 提DNA时PCR所用引物和测序前PCR所用引物可以不同吗？
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zhouwenjie

木虫 (小有名气)

[求助] 做DGGE 提DNA时PCR所用引物和测序前PCR所用引物可以不同吗？已有2人参与

刚接触分子实验，对原理不太清楚。我做土壤细菌的DGGE，提出DNA后以338f和518r为引物扩增后做DGGE。现在想对条带进行测序，想用8-27f和1378-1401r做引物扩增，不知道这样可以吗？求大神们解答。希望有经验的亲们帮助！谢谢！大谢！
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做最好的自己！
1楼2014-12-02 10:22:56
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhouwenjie(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-02 18:38:39
引物都是在序列上设的就可以，只要能P出就可以了。
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永远相信未知的总是美好的！
2楼2014-12-02 17:57:00
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你测序的时候换那对引物的目的是什么？
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3楼2014-12-04 12:15:28
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zhouwenjie

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zshw_001 at 2014-12-02 17:57:00
引物都是在序列上设的就可以，只要能P出就可以了。

我不太懂原理，但是有人跟我说这样测出来会不准！
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做最好的自己！
4楼2014-12-05 12:09:46
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zhouwenjie

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lance-tan at 2014-12-04 12:15:28
你测序的时候换那对引物的目的是什么？

我其实没有什么目的，就是怕测不出来。但是换引物又怕测不准。后边就是普通的测序用的通用引物。
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做最好的自己！
5楼2014-12-05 12:10:47
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lance-tan

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhouwenjie at 2014-12-05 12:10:47
我其实没有什么目的，就是怕测不出来。但是换引物又怕测不准。后边就是普通的测序用的通用引物。...

你做的是V3区嘛？然后做克隆测序的嘛？
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新手入门求各位大神指导
6楼2014-12-05 14:28:35
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zhouwenjie

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lance-tan at 2014-12-05 14:28:35
你做的是V3区嘛？然后做克隆测序的嘛？...

是的，是V3区，条带测序，但是要不要克隆还没定。
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做最好的自己！
7楼2014-12-05 16:57:10
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lance-tan

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhouwenjie at 2014-12-05 16:57:10
是的，是V3区，条带测序，但是要不要克隆还没定。...

切割回收的条带只有200多bp吧，一般都是做克隆然后测序吧。
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新手入门求各位大神指导
8楼2014-12-05 18:48:35
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