| 查看: 2173 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
linxiaolin08捐助贵宾 (初入文坛)
|
[求助]
关于双酶切后连接转化，酶切验证切不开。 已有3人参与
|
|
|
各位虫友，大家好，我的目的基因是1119bp，连接体系应该是没问题的，我们实验室用的都是25微升的体系。 第一次我做了EcoRI和XhoI酶切位点： 该做的对照我都做了，但是实验失败，最后得出的结论是以下原因： 1、基因没有加上酶切位点导致我没切开，连不上。2、我的连接酶失效了不好使。 连接酶不好使的可能性很小。 但是我想换一下酶，所以做了第二次试验： 第二次换了酶切位点以后我选择的是EcoRI和SalI这两个酶，目的基因PCR条带没问题，做过单酶切，也都没问题，但是菌液PCR有条带，质粒PCR后没有条带，也就是说我还是没连上，那我分析了一下，不应该这么凑巧是酶的问题，是否是我设计的引物出现问题，例如这段引物就是对酶切位点有影响导致切不开，所以想换引物。但是这段序列很特别，引物也是好不容易找的，所以不到万不得已我是不想换引物的，各位虫友有什么好的建议么？ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有157人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Takara的BamHI和XhoI双酶切求助
已经有6人回复
- EcoR1酶切体系
已经有11人回复
- 关于双酶切的酶的失活问题
已经有6人回复
- 基因组酶切问题！急！
已经有7人回复
- pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
已经有6人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- PCR产物直接双酶切后电泳看不到条带
已经有30人回复
- 酶切后的补平连接
已经有9人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 连接检测时双酶切总是切不开
已经有9人回复
- 双酶切没有切开，怎么回事啊
已经有6人回复
- 酶切酶连转化后单克隆检测不对
已经有8人回复
- 连接产物双酶切
已经有11人回复
- 双酶切，切不下来
已经有19人回复
- （侯氏出品）双酶切连接反应之全攻略
已经有89人回复
- 双酶切，连接，转化问题
已经有30人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 酶切后未纯化连接出现的问题
已经有18人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】为什么酶切总是切不开？
已经有12人回复
yesucao
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 2
- 应助: 51 (初中生)
- 金币: 3877.1
- 散金: 45
- 红花: 6
- 帖子: 374
- 在线: 203.4小时
- 虫号: 810829
- 注册: 2009-07-17
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2014-12-01 15:58:33
lvbobo823
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 363 (硕士)
- 金币: 7753.3
- 散金: 15
- 红花: 9
- 帖子: 751
- 在线: 189.4小时
- 虫号: 819723
- 注册: 2009-07-31
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2014-12-01 10:20:20
linxiaolin08
捐助贵宾 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 7.5
- 红花: 1
- 帖子: 41
- 在线: 6.6小时
- 虫号: 3415126
- 注册: 2014-09-14
- 专业: 生物化学
3楼2014-12-01 10:48:27
4楼2014-12-01 15:49:44
10