应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPCR绝对定量荧光PCR中做标准质粒获得
51/1返回列表
查看: 2636  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

丹66

新虫 (初入文坛)

[求助] qPCR绝对定量荧光PCR中做标准质粒获得 已有2人参与

虫友们好，我最近在做土壤微生物QPCR,但是困在了标曲这块，想请问一些关于制作标曲的问题！我理解的制作标曲的步骤是：提取土壤基因组；引物扩增；扩增片段与载体连接转入感受态中；从中筛选几个阳性克隆去测序。我想请教的是，这个方法对不？另外为什么要筛选几个阳性克隆？希望虫友们能指导一下，另外希望虫友们给帮忙推荐几篇详细介绍的文章，嘿嘿……
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-29 20:08:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

steamsn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
丹66: 金币+1 2014-11-29 23:29:35
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:46:15
测序准确性。文献比较多，自己检索一下/
赞一下(1人) 回复此楼
我命由我不由天
2楼2014-11-29 21:37:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

丹66

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by steamsn at 2014-11-29 21:37:46
测序准确性。文献比较多，自己检索一下/

也就是从几个克隆里面筛选一个克隆出来，这个克隆的选择依据能具体说一下不丫？嘿嘿

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
3楼2014-11-29 22:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

steamsn

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-01 16:23:20
引用回帖:
3楼: Originally posted by 丹66 at 2014-11-29 22:54:55
也就是从几个克隆里面筛选一个克隆出来，这个克隆的选择依据能具体说一下不丫？嘿嘿
...

挑几个克隆，要做验证阳性（比如通过PCR），而后通过测序验证序列的准确性，选择一个阳性克隆扩大培养，提取质粒，进而测定浓度，梯度稀释，获得标准曲线……
赞一下 回复此楼
我命由我不由天
4楼2014-11-29 23:27:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-12-01 16:23:24
多取几个克隆是为了验证转化子是否正确，而且应该再验证一下是否存在假阳性现象
赞一下 回复此楼
5楼2014-12-01 15:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 丹66 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭