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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR和质粒PCR的比较
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yesucao

木虫 (正式写手)

[求助] 菌液PCR和质粒PCR的比较 已有4人参与

本人最近在大批量的做克隆，需要进行PCR验证，发现一个很奇怪的现象：用单克隆菌液做PCR发现空载率很高，但是用提取的质粒进行PCR验证发现空载率很低。同一个人操作，PCR mix和PCR程序完全一样，就是模板不同。究竟用菌液进行验证插入正确的概率如何？麻烦虫虫们发表一下自己的观点啊。。。。。。
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1楼 2014-11-19 16:03:06
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人认为，菌液pcr假阳性高，可能是因为挑克隆时沾到了未连接的DNA片段或未转化好的已连接载体

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-11-22 04:53:10
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yuren2009

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
yesucao: 金币+1, ★有帮助 2014-11-20 16:29:02
菌液验证方便快捷，但是质粒验证说服力更强。
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学习使你立于不败之地
2楼2014-11-20 16:04:24
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yesucao(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:37:44
yesucao: 金币+3, ★有帮助 2014-11-21 12:18:24
总的来说，准确率：质粒酶切验证>质粒PCR>菌液PCR。你用多种酶切进行验证，对了就可以测序。
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3楼2014-11-20 17:13:21
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conanyangqun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
今天刚刚做的。同一个质粒，菌液PCR效果不如质粒PCR。两个都是阳性，但酶切结果却不对。不清楚为啥PCR扩出来了。感觉，PCR不太稳定吧。。。
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4楼2014-11-22 04:14:35
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