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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] TA克隆 7.7Kb大片段 已有11人参与

请教各位,7.7KB的大片段能够转进T载体吗?什么样子的T载体合适?转成功的关键点是什么?谢谢解答!
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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czcpudai(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:16:05
用T载体克隆的话,2~3kb效率比较高,超过5kb难度就比较大了,效率很低。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个盒子你可以试一下,里面有个CE Entry vector,你可以把片段克隆到这个载体上面去,这个载体可以克隆最长10kb的片段进去。
10楼2014-11-18 09:07:07
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普通回帖

MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:36:54
czcpudai: 金币+1, 有帮助 2014-11-17 22:16:24
我认为可以 只要你计算好比例 祝你成功
2楼2014-11-17 11:03:55
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:02
czcpudai: 金币+1, 有帮助 2014-11-17 22:18:27
7.7K连上T载体难度很大,建议分段扩增,分段连接。
3楼2014-11-17 11:04:14
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:09
czcpudai: 金币+1 2014-11-17 22:19:14
大片段的连接效率低是肯定的,连接的时候浓度要高。连接时间要长。
学习再学习,努力再努力。
4楼2014-11-17 15:27:41
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:17
czcpudai: 金币+1 2014-11-17 22:19:58
片段当载体  载体当片段用
5楼2014-11-17 17:06:28
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:03:55
我认为可以 只要你计算好比例 祝你成功

您说的比例大概是怎么样的?我用的全式金的,说明书上知名载体与Insert的最佳摩尔比例为1:7,载体为pEASY-T载体。您做过这样子的连接吗?
6楼2014-11-17 22:18:15
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by caihang at 2014-11-17 11:04:14
7.7K连上T载体难度很大,建议分段扩增,分段连接。

您好,您说的分段连接具体的做法是怎么样的?谢谢解答!
7楼2014-11-17 22:18:58
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by jian212 at 2014-11-17 15:27:41
大片段的连接效率低是肯定的,连接的时候浓度要高。连接时间要长。

效率确实会低?有成功的可能吗?哈哈,给自己涨点自信
8楼2014-11-17 22:19:51
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-11-17 17:06:28
片段当载体  载体当片段用

谢谢!  怎么理解呢?
9楼2014-11-17 22:20:11
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