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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » TA克隆 7.7Kb大片段
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] TA克隆 7.7Kb大片段 已有11人参与

请教各位，7.7KB的大片段能够转进T载体吗？什么样子的T载体合适？转成功的关键点是什么？谢谢解答！
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1楼 2014-11-17 09:55:41
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百褶裙de夏天

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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czcpudai(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:16:05
用T载体克隆的话，2～3kb效率比较高，超过5kb难度就比较大了，效率很低。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个盒子你可以试一下，里面有个CE Entry vector，你可以把片段克隆到这个载体上面去，这个载体可以克隆最长10kb的片段进去。
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10楼2014-11-18 09:07:07
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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:36:54
czcpudai: 金币+1, ★有帮助 2014-11-17 22:16:24
我认为可以 只要你计算好比例 祝你成功
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2楼2014-11-17 11:03:55
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:02
czcpudai: 金币+1, ★有帮助 2014-11-17 22:18:27
7.7K连上T载体难度很大，建议分段扩增，分段连接。
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3楼2014-11-17 11:04:14
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jian212

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:09
czcpudai: 金币+1 2014-11-17 22:19:14
大片段的连接效率低是肯定的，连接的时候浓度要高。连接时间要长。
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学习再学习，努力再努力。
4楼2014-11-17 15:27:41
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-17 20:37:17
czcpudai: 金币+1 2014-11-17 22:19:58
片段当载体  载体当片段用
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5楼2014-11-17 17:06:28
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:03:55
我认为可以 只要你计算好比例 祝你成功

您说的比例大概是怎么样的？我用的全式金的，说明书上知名载体与Insert的最佳摩尔比例为1:7，载体为pEASY-T载体。您做过这样子的连接吗？
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6楼2014-11-17 22:18:15
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by caihang at 2014-11-17 11:04:14
7.7K连上T载体难度很大，建议分段扩增，分段连接。

您好，您说的分段连接具体的做法是怎么样的？谢谢解答！
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7楼2014-11-17 22:18:58
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by jian212 at 2014-11-17 15:27:41
大片段的连接效率低是肯定的，连接的时候浓度要高。连接时间要长。

效率确实会低？有成功的可能吗？哈哈，给自己涨点自信
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8楼2014-11-17 22:19:51
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czcpudai

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-11-17 17:06:28
片段当载体  载体当片段用

谢谢！  怎么理解呢？
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9楼2014-11-17 22:20:11
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