24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2328  |  回复: 27

wendy73

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

21楼2014-11-21 08:53:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by wendy73 at 2014-11-21 08:51:35
刚做了一个5Kb的,连接效率还是不错的,首先是用的LA酶还是PFU酶,确定是否末端加A,然后加长连接时间,我是连了5个小时,最后转化效率还是比较好的。如果能整段克隆就尽量不要分段去做,先试试吧

你好,请问你用的T载体是何种T载体?pMD-19 simple T载体吗?我现在用全式金的Trans-T试过,效果不是太好。还有,你的模板的浓度时多大?与载体是何种比例加的,谢谢!
22楼2014-11-24 19:25:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意萧02

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-18 09:07:07
用T载体克隆的话,2~3kb效率比较高,超过5kb难度就比较大了,效率很低。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个盒子你可以试一下,里面有个CE Entry vector,你可以把片段克隆到这个载体上面去,这个载体可以 ...

ClonExpress Entry One Step Cloning Kit可以用做过表达吗?我扩不出CDS,只能扩出DNA,有5K这样大小,能用这个载体吗?
23楼2014-11-24 20:55:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-11-24 20:55:00
ClonExpress Entry One Step Cloning Kit可以用做过表达吗?我扩不出CDS,只能扩出DNA,有5K这样大小,能用这个载体吗?...

这个是做克隆的试剂盒,不能做表达,5kb的应该好做
24楼2014-11-24 22:50:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小木sigh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-11-19 16:16:18
能问问怎么个温柔法吗?
...

他们的克隆用的是同源重组的,跟我以前用的不太一样,打电话问他们技术~蛮好的,慢慢跟我说,可以算手把手教我做实验了
25楼2014-11-25 10:11:50
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wendy73

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

26楼2014-11-25 11:02:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
26楼: Originally posted by wendy73 at 2014-11-25 11:02:39
用的PUC-T simple,PMD-19以前也用过,效果一样的。目的片段胶回后浓度40ng/ul,连接加了1ul载体,2.5ul片段。连接时比平时时间长了很多。...

谢谢解答,最近刚做出来,终于连上了!
27楼2014-11-25 23:48:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wendy73

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

28楼2014-11-26 09:14:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 czcpudai 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 调剂 +7 不逢春 2026-04-05 8/400 2026-04-05 23:34 by 来看流星雨10
[考研] 材料调剂 +6 一样YWY 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:30 by 南航~万老师
[考研] 318求调剂 +11 ykyhsa 2026-04-05 13/650 2026-04-05 12:44 by aidndnjck
[考研] 一志愿西北农林畜牧专硕336分求调剂 +3 5ourr 2026-04-03 3/150 2026-04-05 10:40 by JOKER0401
[考研] 323分(计算机视觉和大模型项目)能直接上手 +3 chaoxiicy 2026-04-01 3/150 2026-04-05 00:50 by chongya
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-02 13/650 2026-04-04 23:10 by 无际的草原
[考研] 324求调剂 +14 想上学求调 2026-04-02 15/750 2026-04-04 20:31 by 无际的草原
[考研] 材料专业383求调剂 +8 郭阳阳阳成 2026-04-03 8/400 2026-04-04 10:29 by Rednal.
[考研] 考研调剂 +5 小sun要好运 2026-04-03 5/250 2026-04-03 21:43 by 啵啵啵0119
[考研] 281求调剂 +10 aaawhy 2026-04-03 10/500 2026-04-03 21:42 by lbsjt
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[基金申请] 请问共同通讯和共同一作的认可度问题 10+4 psa1234 2026-04-01 10/500 2026-04-03 11:08 by Kittylucky
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突, 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突,
[考研] 314求调剂 +11 1xiaojun23 2026-03-31 12/600 2026-04-02 12:31 by 1xiaojun23
[考研] 一志愿北京科技,085601总分305求调剂 +9 半生瓜! 2026-04-01 11/550 2026-04-02 08:28 by Wang200018
[考研] 302求调剂一志愿北航070300,本科郑大化学 +8 圣日耳曼条 2026-04-01 11/550 2026-04-02 07:40 by chemdavid
[考研] 材料专业调剂 +5 啦啦啦哭 2026-03-31 6/300 2026-04-01 16:48 by JourneyLucky
[考研] 环境工程调剂 +9 hyzzzzzzz. 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:20 by salamander`
[考研] 【调剂】一志愿厦大生物与医药调剂 +3 Echo虾米 2026-03-31 3/150 2026-04-01 08:40 by JourneyLucky
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
信息提示
请填处理意见