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wendy73

禁虫 (初入文坛)

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21楼2014-11-21 08:53:13
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
20楼: Originally posted by wendy73 at 2014-11-21 08:51:35
刚做了一个5Kb的,连接效率还是不错的,首先是用的LA酶还是PFU酶,确定是否末端加A,然后加长连接时间,我是连了5个小时,最后转化效率还是比较好的。如果能整段克隆就尽量不要分段去做,先试试吧

你好,请问你用的T载体是何种T载体?pMD-19 simple T载体吗?我现在用全式金的Trans-T试过,效果不是太好。还有,你的模板的浓度时多大?与载体是何种比例加的,谢谢!
22楼2014-11-24 19:25:41
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意萧02

木虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 百褶裙de夏天 at 2014-11-18 09:07:07
用T载体克隆的话,2~3kb效率比较高,超过5kb难度就比较大了,效率很低。ClonExpress Entry One Step Cloning Kit这个盒子你可以试一下,里面有个CE Entry vector,你可以把片段克隆到这个载体上面去,这个载体可以 ...

ClonExpress Entry One Step Cloning Kit可以用做过表达吗?我扩不出CDS,只能扩出DNA,有5K这样大小,能用这个载体吗?
23楼2014-11-24 20:55:00
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
23楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-11-24 20:55:00
ClonExpress Entry One Step Cloning Kit可以用做过表达吗?我扩不出CDS,只能扩出DNA,有5K这样大小,能用这个载体吗?...

这个是做克隆的试剂盒,不能做表达,5kb的应该好做
24楼2014-11-24 22:50:50
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小木sigh

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-11-19 16:16:18
能问问怎么个温柔法吗?
...

他们的克隆用的是同源重组的,跟我以前用的不太一样,打电话问他们技术~蛮好的,慢慢跟我说,可以算手把手教我做实验了
25楼2014-11-25 10:11:50
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wendy73

禁虫 (初入文坛)

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26楼2014-11-25 11:02:39
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

引用回帖:
26楼: Originally posted by wendy73 at 2014-11-25 11:02:39
用的PUC-T simple,PMD-19以前也用过,效果一样的。目的片段胶回后浓度40ng/ul,连接加了1ul载体,2.5ul片段。连接时比平时时间长了很多。...

谢谢解答,最近刚做出来,终于连上了!
27楼2014-11-25 23:48:07
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wendy73

禁虫 (初入文坛)

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28楼2014-11-26 09:14:59
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